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目的：探讨RNA干扰技术沉默HSP70基因表达对人喉癌细胞株Hep-2生物活性的影响。方法：采用免疫组化SP染色方法检测6例声带白斑(声带白斑组)、6例喉乳头状瘤（喉乳头状瘤组）和7例声带息肉（对照组）的组织标本中HSP70和HSF1蛋白表达。利用免疫荧光染色检测HSP70在Hep-2中的表达，构建针对HSP70基因的siRNA真核表达载体，以携带HSP70基因的人喉癌Hep-2细胞系为靶细胞，通过阳离子脂质体法将重组质粒pHSP70-shRNA转入Hep-2喉癌细胞。采用流式细胞术检测Hep-2细胞的细胞周期分布情况，实时定量RT-PCR、免疫荧光及其它技术研究siRNA沉默HSP70表达后对其下游基因CyclinD1、C-myc、Gadd45和P21表达的影响。结果:1.免疫组化结果显示，HSP70阳性表达为棕黄色颗粒，定位于细胞浆和细胞核。在声带息肉中低水平表达，HSP70主要定位于细胞核表达。在喉乳头状瘤、声带白斑表达较强。H-score法半定量结果表明：喉乳头状瘤组HSP70表达（4.25±0.53）与声带息肉组（3.63±0.58）比较明显增高（P<0.05），声带白斑组HSP70表达最强（5.43±0.40），与声带息肉组比较差异有统计学意义（P<0.01）。HSF1阳性表达大部分定位于细胞浆，少量细胞核。其表达趋势与HSP70表达趋势相似。对声带息肉、喉乳头状瘤和声带白斑组织中HSP70蛋白表达量与HSF1表达的关系进行直线回归分析，结果显示：HSP70蛋白表达量与HSF1的变化呈现正的直线相关（r=0.867，P<0.01）。2．免疫荧光结果显示，HSP70在Hep-2细胞中呈高表达，明显高于鼻咽上皮永生细胞系NP-69。3.流式细胞术检测结果显示，转染重组质粒pHSP70-shRNA后, Hep-2细胞增殖明显受到抑制，细胞凋亡增加, G1期比例上升, G2期比例明显减少；4.免疫荧光结果显示:实验组(pHSP70-shRNA质粒)较对照组（pRNAT-U6.1/Neo对照质粒）HSP70的表达减弱，同时伴有下游基因C-myc、CyclinD1、Gadd45基因表达的下降。5.实时定量RT-PCR结果显示，转染组HSP70和CyclinD1的mRNA表达明显低于对照组，而P21mRNA的表达明显高于对照组。转染组中CyclinD1mRNA表达的下调和P21mRNA表达的上调可能与HSP70的基因沉默相关。结论：1. HSP70在Hep-2细胞中高表达，可能在喉癌的发生发展中发挥着重要的作用。2.重组质粒pHSP70-shRNA明显下调HSP70蛋白在Hep-2喉癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡,导致细胞中与增殖和凋亡相关基因的表达改变，推测HSP70基因沉默可能与促进喉癌细胞的凋亡相关。