【摘 要】
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目的:探讨circRNA MAN2B2在肝癌中的表达及可能的调控作用机制。方法:1、本实验共入组32名肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）患者,搜集病人手术期间切除的肝癌组织以及对应的癌旁正常组织,随后研磨该组织标本并提取RNA,通过qPCR分析组织中circRNA MAN2B2的表达情况;构建三种细胞系:HL-7702（正常肝细胞）、HepG2肝癌细胞和HuH-7肝癌
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目的:探讨circRNA MAN2B2在肝癌中的表达及可能的调控作用机制。方法:1、本实验共入组32名肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）患者,搜集病人手术期间切除的肝癌组织以及对应的癌旁正常组织,随后研磨该组织标本并提取RNA,通过qPCR分析组织中circRNA MAN2B2的表达情况;构建三种细胞系:HL-7702（正常肝细胞）、HepG2肝癌细胞和HuH-7肝癌细胞,提取细胞RNA用qPCR方法验证细胞系中环形RNA MAN2B2的表达情况。2、采用脂质体转染法将特异性针对CircRNA MAN2B2的siRNA质粒载体转染到HepG2和Huh7细胞中,qPCR筛选阳性细胞,CCK8和Ed U实验测定细胞的增殖情况;运用携带有环形RNA MAN2B2基因全长序列的重组质粒载体转染到正常肝细胞中,qPCR测定细胞筛选结果,CCK8和EdU实验测定细胞的增殖情况。3、利用双荧光素酶报告基因实验、RT-PCR实验验证CircRNA MAN2B2与微小RNA（microRNA,miRNA）miRNA-217的关系;4、双荧光素酶报告基因实验、RT-PCR实验验证miRNA-217与MAPK1之间的关联;5、CCK8和EdU实验验证CircRNA MAN2B2与MAPK1的关系。结果:1、与癌旁正常组织相比,circRNA MAN2B2在肝癌组织中表达上调;与HL-7702相比,circMAN2B2在Hep-G2和Huh-7细胞中高度表达。2、成功构建si-CircRNA MAN2B2肝癌细胞系,细胞中CircRNA MAN2B2表达降低抑制肝癌细胞的增殖;成功构建Over-CircRNA MAN2B2肝细胞系,细胞中Circ RNA MAN2B2表达增加促进肝细胞的增殖;3、circMAN2B2与miRNA-217存在相互作用,在si-CircRNA MAN2B2肝癌细胞系中miRNA-217表达明显增加,在Over-CircRNA MAN2B2肝细胞系中明显降低;4、在si-miRNA217肝癌细胞系中MAPK1表达明显增加,在Over-miRNA217肝细胞系中明显降低;5、在过表达CircRNA MAN2B2细胞系中MAPK1表达明显增加,在下调CircRNA MAN2B2肝癌细胞系中MAPK1表达明显降低,且过表达MAPK1能够弥补CircRNA MAN2B2表达降低对癌细胞增殖的抑制作用。结论:1.circRNA MAN2B2在肝癌组织及肝癌细胞中表达明显增加;2.circRNA MAN2B2通过miRNA-217/MAPK1轴进而促进肝癌细胞的增殖。
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