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罗汉果花叶病毒严重影响罗汉果的产量,通过转基因获得抗病毒品种是防治罗汉果病毒病最有效的途径,转基因技术和RNAi技术的日渐成熟为培育抗花叶病毒转基因罗汉果奠定了基础。小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是罗汉果花叶病的主要病原病毒,分布较广、危害较重。为了针对生产实践中普遍发生的花叶病毒培育具有生产应用价值的抗病毒罗汉果品种,本研究以规模种植罗汉果基地的花叶病发病植株为基因克隆的实验材料。为了提高RNA干扰罗汉果花叶病毒复制的效率,把感染罗汉果的花叶病毒多个功能基因片段串联起来作为RNAi目标片段,转化罗汉果,从而建立一个稳定高效的遗传转化体系,利用基因工程策略获得对花叶病毒具有广谱抗性的抗花叶病毒罗汉果植株。本研究优化了罗汉果组织培养扩繁的条件,最适外植体为茎尖,芽诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,诱导率为97.5%;继代培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA3 0.1 mg/L,增殖率为9;通过叶片再生实验结果表明:叶片诱导再生苗的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+TDZ0.05 mg/L,出芽系数达10.68,为抗病毒罗汉果转基因实验提供充足的材料。本文研究了罗汉果组培苗的茎段、叶柄及叶片不同类型的外植体的再生能力,结果表明,叶片的再生率明显高于叶柄和茎段,是罗汉果遗传转化最佳外植体的选择。同时对罗汉果遗传转化的条件进行优化,研究结果表明:预培养1 d、菌液浓度的OD值为0.2、外植体与农杆菌侵染15 min、共培养4 d、抗生素羧苄霉素的浓度为200 mg/L、筛选剂G418浓度以40 mg/L作为筛选压力的转化率最高。本研究将ZYMV的Hc-pro,NIa,NIb,CP基因和3’UTR区多个基因片段串联构成RNAi的目标序列,获得的目的片段克隆到可以形成RNAi茎环结构的中间载体pXQ中,形成RNAi结构片段。通过PCR鉴定阳性克隆,最终获得含有正确目的片段的植物表达载体pLou-Anti5。通过农杆菌介导的方法,把目的基因导入到罗汉果中,获得了89株转基因罗汉果植株,经侵染实验证明,转基因罗汉果具有一定的抗性。从而获得不仅具有广谱抗花叶病毒特性,而且具有抗除草剂特性的转基因罗汉果阳性植株,具有很大的生产应用前景。