【摘 要】
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目的：利用基因工程技术正确克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(SP—C)的cDNA序列。 方法：Trizol法提取正常成人肺组织总RNA，设计特异的上下游引物，经逆转录聚合酶链反应扩增获得S
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目的：利用基因工程技术正确克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(SP—C)的cDNA序列。
方法：Trizol法提取正常成人肺组织总RNA，设计特异的上下游引物，经逆转录聚合酶链反应扩增获得SP—CcDNA序列。用内切酶XHOI和NOTl分别双酶切SP—CcDNA序列及真核表达质粒pcDNA3.1(+)序列的XHOI和NOTI酶切位点。DNA凝胶回收SP—CcDNA序列及质粒pcDNA3.1(+)序列后用T1DNA连接酶体外连接进行重组，再将重组DNA转化至感受态大肠杆菌DH5α中，经复苏后，在含Amp的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。对重组质粒进行双酶切鉴定及测序。
结果：LB固体培养基上挑取的的4个单菌落经双酶切鉴定，证实均为阳性克隆，测序结果与Gerlebank中碱基序列一致。SP—C与pcDNA3.1(+)体外重组成功，命名为重组质粒pcDNA3.1(+)/SP—C。
结论：成功的从正常成人肺组织中克隆出SP—C基因，并正确插入至质粒pcDNA3.1(+)中SP—C真核特异性表达载体。重组质粒构建成功。
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