鱼类干扰素和核因子45基因克隆、结构分析及其在酵母中表达的研究

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论文对鱼类两种重要免疫相关基因——干扰素(Interferon;IFN)和核因子(nuclearfactor;NF)45开展了研究。论文第一部分从草鱼中克隆了IFN基因,序列分析表明,草鱼IFNcDNA全长1191bp,其中包括543bp的开放阅读框,34bp的5’非翻译区和614bp的3非翻译区。草鱼IFN基因编码181个氨基酸,前22个氨基酸为信号肽。采用RT-PCR方法检测了经polyI:C和出血病病毒诱导前后草鱼IFN的组织表达情况,结果显示,IFN在脑、心肌、头肾中呈现高表达,在其他组织中也有发现。构建重组载体IFN-pYES2,电转化进入酿酒酵母INVScl菌株中,重组子经半乳糖诱导,发酵培养。诱导表达后的IFN目的蛋白提取物能诱导草鱼ZC7901细胞中Mx基因的表达。 论文第二部分克隆了草鱼NF45基因,序列分析表明,草鱼NF45cDNA全长1563bp,其中5’非翻译区有24bp,3’非翻译区375bp,开放阅读框1164bp。该基因编码一个具有387个氨基酸残基的蛋白质,分子量大小约为42.8kD。采用RT-PCR的方法检测了草鱼NF45的组织分布,发现该基因在多种组织中都有表达,但在脾脏、肝脏和鳃中的表达量较低。鱼体经PHA诱导后,NF45在各组织中的表达呈上调趋势,说明NF45在PHA激发的免疫应答中发挥作用。 干扰素是重要的抗病毒因子,核因子45则是重要的白细胞介素转录调控因子,对IL-2等基因的表达发挥重要作用。由于在进化过程中,鱼类处于连接高等脊椎动物和低等无脊椎动物的特殊地位,因此对鱼类干扰素和核因子45的研究,有助于揭示干扰素和核因子45的分子起源和进化规律,同时对鱼类病害防治也具有潜在开发应用价值。
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