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本研究以‘美人指’葡萄(Vitis vinifera L.’Manicure Finger’)为材料,建立‘美人指’葡萄不定芽再生体系和体细胞胚胎发生与植株再生体系;采用农杆菌介导法将PGIP基因导入‘美人指’葡萄中,以期获得定向改良抗病性状的‘美人指’葡萄新种质。本实验研究结果如下:1.以‘美人指’葡萄为试材,研究了不同外植体类型、激素浓度配比以及暗培养时间等对不定芽再生的影响。结果表明:叶片、叶柄、茎段外植体均可再生出不定芽,其中叶柄的再生率最高;TDZ对‘美人指’葡萄叶柄再生效果比6-BA好,IBA诱导‘美人指’葡萄叶柄不定芽再生率高于NAA和2,4-D;暗培养3w时,‘美人指’葡萄叶柄的再生率最高。叶片再生的最适培养基为:MS+1.0mg·L-TDZ+0.1mg·L-1IBA,再生率为60.71%,增值系数为5.65;叶柄再生的最适培养基为:MS+1.0mg·L-1TDZ+0.1mg·L-1IBA,再生率为93.10%,增殖系数为5.91;茎段再生的最适培养基为:MS+1.. mg·L-1TDZ+0.2mg·L-1IBA,再生率为47.37%,增殖系数为5.00。将再生不定芽置于3/4MS+0.35mg·L-1IBA培养基上诱导生根。完整植株培养35~50d后炼苗移栽,成活率可达90%。2.以‘美人指’的花药和雌蕊为试材,进行体细胞胚诱导与再生体系的建立。花药和雌蕊在单核靠边期进行收集,培养在附加不同浓度6-BA和2,4-D的MS培养基上诱导胚性愈伤组织,培养条件为黑暗,25±2℃。3个月后,花药和雌蕊诱导产生胚性愈伤组织,胚性愈伤诱导率分别为3.51%和4.55%。在附加1.0mg·L-16-BA的MS基本培养基上诱导体细胞胚状发生。鱼雷胚阶段的体细胞胚在未添加任何激素的MS培养基上的萌发率为83.89士8.39%。成熟的胚状体在0.15mg·L-1IBA和0.5g·L-1AC的组合下,成苗率高达72.33士12.21%。通过胚胎在胚性愈伤组织诱导培养基上的反复愈伤化,可以确保有足够的遗传转化材料。3.在已经优化的农杆菌介导转化体系的基础上,将从野生葡萄蘡奠中克隆的PGIP基因,通过农杆菌介导法转化‘美人指’葡萄,共获得9个抗性株系,利用PCR和RT-PCR检测。结果表明,7株PCR检测呈阳性,其中3株通过Rt-PCR检测。初步证实,PGIP基因已经整合到‘美人指’葡萄的基因组中。