Surfactin的结构鉴定及其诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

• 作 者: 焦润芝
• 发表日期: 2009年01期
• 关键词: Surfactin 分离纯化 结构鉴定 MCF-7 细胞凋亡 TUNEL Bcl-2

枯草芽孢杆菌能够产生多种脂肽类生物表面活性剂,其中的Surfactin由于具有很强的表面张力以及广泛的生物活性受到国内外研究者的关注。目前,国内外对脂肽Surfactin的研究主要集中在其表面活性方面,而对其生物活性特别是在抗肿瘤活性方面的研究少有报道。本论文以从纳豆中分离得到的Bacillus natto TK-1为研究对象,在前期工作的基础上,对脂肽进行了分离纯化,并研究了Surfactin对细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,同时研究了MCF-7细胞周期变化及凋亡现象。从相关蛋白方面考察了Surfactin诱导乳腺癌细胞凋亡的信号途径。以确定Surfactin诱导乳腺癌细胞凋亡的主要途径。利用酸沉、醇提和薄层层析等方法从Bacillus natto TK-1发酵液中分离得到的脂肽经过HPLC、ESI-MS和IR分析可知是分子量为1036D的脂肪酸链上有15个碳的环状脂肽Surfactin。通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）法发现Surfactin在体外可以很好的抑制肿瘤细胞MCF-7的增殖,并且呈现出浓度和时间依赖关系,其中细胞被处理48 h时的IC₅₀是38.77mg/L。倒置显微镜和荧光显微镜检测发现Surfactin可以引起细胞出现一些典型的形态学改变。通过原位缺口末端标记技术检测凋亡（TUNEL）发现Surfactin可诱导MCF-7细胞凋亡,而且这种抑制作用呈现明显的时间依赖性。Fluo-3/AM探针激光共聚焦显微镜检测细胞内[Ca²⁺]_i相对荧光强度的变化随着时间的延长由8.67增加到208。免疫印迹实验表明p53和Bax/Bcl-2的表达量明显增高,表明Surfactin能够通过调控这些蛋白的表达来诱导MCF-7细胞的凋亡。