研究ADSCs联合BMP-2治疗幼年兔股骨头骺坏死的效果

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目的:探讨股骨头骺钻孔后ADSCs联合BMP-2治疗幼年兔股骨头骺缺血坏死的效果。方法:1、细胞实验部分:将冻存的二代ADSCs复苏、传代后用BrdU标记,并将标记的ADSCs行MTT试验、成骨诱导及茜素红染色试验;2、动物实验部分:将45只幼年新西兰兔随机均分为5组并破坏左侧股骨头骺血供制备Perthes病动物模型。造模后2周,A组:予以假手术作为股骨头骺缺血坏死组,B组:予以钻孔;C组:钻孔后移植入ADSCs; D组:钻孔后注入BMP-2;E组:钻孔后注入ADSCs及BMP-2。于造模后4、6、10周活体行MRI检查、取材后观察各组股骨头骺外观、并行X线检查,组织切片HE染色后进行光镜观察,免疫荧光染色检测,结果进行相关分析。结果:1、细胞试验部分:①ADSCs传代培养生长良好,无自发分化现象。②约有90%的ADSCs被BrdU标记;且具有良好的增殖与成骨分化能力。2、动物实验部分:①X-ray检测:造模后6周,C、D、E组股骨头骺商较A、B组大(P<0.05);10周时,D组优于A、B组(P<0.05);而C、E组显著优于A、B组(P<0.01)。②MR检测:A、B组造模后6周、10周时股骨头骺均出现点状或片状低信号坏死灶,髋关节间隙增宽,C、D、E组造模后4周、6周时股骨头骺内主要为混杂信号,髋关节结构良好,10周时,C、E组股骨头骺内信号均匀且髋关节结构良好,而D组股骨头骺内信号稍混杂,髋关节间隙增宽。③组织形态学观察:C、D、E组骨小梁面积在造模后4周时较A、B组高(P<0.05),6周、10周时,D组骨小梁面积仍优于A、B组(P<0.05),而C、E组明显优于A、B组(P<0.01)。各组生长板的厚度均无明显差异(P>0.05)。④C组和E组的组织切片进行免疫荧光检测:移植细胞2周时,股骨头骺内间质可见广泛分布的BrdU阳性的细胞,而骨小梁内未见阳性细胞,4周、8周时,发现骨小梁内有BrdU阳性细胞。结论:对于血管损伤所致的幼年兔股骨头骺缺血性坏死,经过生长板钻孔并予以ADSCs联合BMP-2治疗,能在增加股骨头骺血运的同时还有利于新骨形成;从而防止或减缓股骨头骺的塌陷。
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