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本研究建立了阿莫西林、青霉素、氨苄西林、苯唑西林、头孢唑啉、氯唑西林、头孢氨苄及头孢羟氨苄等8种β—内酰胺类药物在猪肉、猪肝及猪肾组织中的高效液相色谱—电喷雾串联质谱多残留检测方法。
猪肉、猪肝、猪肾样品用乙腈—水(80+20,V/V)提取,经HLB柱净化,氮气吹干,用水定容,正己烷除脂后,进行LC—MS/MS检测。含0.1%甲酸的乙腈—甲醇(50+50,V/V)和0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱外标法定量。
8种β—内酰胺类抗生素在5.00~100μg/L范围内,峰面积与浓度呈现很好的线性,相关系数大于0.99。在猪肉中添加25、50及100μg/kg三个浓度水平,处理后测定,8种药物的回收率、批内变异系数、批间变异系数分别为阿莫西林60.0%~74.4%、1.1%~13%、12%~17%,青霉素82.1%~98.2%、1.6%—13%、10%~17%,氨苄西林74.2%~85.6%、2.3%~10%、7.3%~11%,苯唑西林78.6%~97.7%、2.9%~14%、14%~17%,头孢唑啉85.1%~105.0%、2.1%~13%、13%~14%,氯唑西林75.6%~89.3%、3.1%~14%、12%~16%,头孢氨苄68.7%~75.8%、2.2%~9.8%、6.8%~18%,头孢羟氨苄54.2%~68.6%、4.1%~14%、11%—16%。
在猪肝中添加25、50及100μg/kg三个浓度水平,处理后测定,8种药物的回收率、批内变异系数、批间变异系数分别为阿莫西林51.1%~68.1%、4.6%~18%、15%~18%,青霉素67.9%~89.3%、2.9%~11%、6.5%~11%,氨苄西林51.7%~71.6%、1.1%~15%、11%~17%,苯唑西林63.4%~88.6%、2.8%~9.7%、8.8%~12%,头孢唑啉70.0%~88.9%、1.3%~11%、7.3%~12%,氯唑西林70.4%~88.8%、4.2%~16%、11%~14%,头孢氨苄63.9%~79.7%、2.6%~13%、9.9%~15%,头孢羟氨苄54.1%~66.2%、2.5%~15%、10%~17%。
在猪肾中添加25、50及100μg/kg三个浓度水平,处理后测定,8种药物的回收率、批内变异系数、批间变异系数分别为阿莫西林55.7%~74.1%、2.1%~12%、15%~19%,青霉素85.3%~105.1%、3.7~12、9.2%~18%,氨苄西林68.7%~83.2%、2.9%~14%、7.1%~16%,苯唑西林71.5%~90.7%、6.1%~15%,13%~17%,头孢唑啉79.1%~98.1%、4.0%—15%、13%~17%,氯唑西林75.3%~89.5%、4.8%~14%、8.9%~19%,头孢氨苄82.5%~97.7%、2.2%~12%、8.2%~19%,头孢羟氨苄68.6%~87.6%、5.4%~14%、11%~18%。
8种β—内酰胺类药物在猪肉中的检测限(LOD)和定量限(LOQ)范围为:0.5μg/kg~2.5μg/kg;在猪肝中LOD和LOQ为:0.5μg/kg~5μg/kg;在猪肾中LOD和LOQ为:0.5μg/kg~2.5μg/kg。
实验结果表明,本研究建立的高效液相色谱—电喷雾串联质谱法检测猪肉、猪肾及猪肝等组织中的8种β—内酰胺类抗生素,方法灵敏度高、特异性强、重现性好,前处理方法简单易行,符合残留检测的要求。