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本文通过对EPO糖基化修饰的检测，分析灌注培养过程中EPO糖基化的变化规律，以期为其生产工艺的优化提供理论指导。
首先，建立了用于EPO唾液酸化程度分析的高灵敏度固相pH梯度等电聚焦电泳方法；其次，建立了用于EPO分子N-糖链分支水平分析的凝集素酶联免疫检测方法，以及用于上清液中EPO含量分析的间接双抗体夹心酶联免疫检测方法；最后，通过对两批次7.5 L灌注培养收获液的分析，初步掌握了灌注培养过程中EPO糖基化的变化规律。
结果显示，灌注培养过程中EPO的唾液酸化程度随培养时间而改变，产物收获阶段，前期唾液酸化程度较好，后期唾液酸化程度较差。进一步的分析发现，在培养后期，EPO的糖链分支水平也呈现下降趋势。这表明，EPO的唾液酸化下降可能缘于糖链分支水平的下降，和由此导致的单位EPO分子糖链末端唾液酸数量的减少。结合培养过程中细胞活性的分析，表明细胞活性的下降是造成EPO分子糖基化修饰不完全的关键因素。
本文提示，在重组CHO细胞灌注培养生产EPO过程中，进一步优化生产工艺，如延长细胞活性和缩短灌注培养过程，将有助于改善EPO的糖基化和提高产品质量。