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背景目的白血病是高发的造血系统恶性肿瘤。其治疗以化疗、骨髓移植为主，而由于部分化疗药物的耐药及严重的副作用，预后较差，因此迫切需要寻找新的有效的治疗方法或者药物靶点。磷酸葡萄糖异构酶（phosphoglucose isomerase，PGI）是各种组织中参与糖酵解和糖异生途径的酶，在细胞内催化葡萄糖-6-磷酸酶与果糖-6-磷酸酶之间的相互转化。当PGI被分泌到细胞外，对周围细胞发挥各种作用时，被称为自分泌活动因子（autocrine motility factors,AMF）。PGI/AMF的过表达可以促进肿瘤细胞的生长、浸润、转移，下调PGI/AMF的表达可抑制肿瘤细胞的增殖。课题组前期研究表明：用人参多糖GPS作用于白血病细胞，其PGI基因受到明显的抑制；下调PGI基因可抑制人白血病细胞KG1α的增殖；同时发现人参皂苷对白血病细胞株也有明显的增殖抑制作用。为研究人参皂苷对白血病的影响是否与PGI相关，我们通过RNA干扰的方式下调高表达PGI的KG1α细胞的PGI，同时用药效最佳的人参皂苷处理转染细胞株，来观察下调PGI/AMF基因对白血病细胞生物学特性的影响,以及PGI/AMF对人参皂苷药效的影响和相关机制。方法第一部分通过CCK-8法在人参皂苷Rb1、Rg1、Rh2中筛选对人白血病KG1α细胞株药效最佳的人参皂苷。运用FCM检测人参皂苷对KG1α细胞株周期和凋亡的影响。采用Western-Blot法检测人参皂苷对KG1α细胞株P53、P21、Cleaved Caspase-3、CyclinD1表达的影响。第二部分用构建好表达PGI siRNA的慢病毒质粒转染高表达PGI的白血病KG1α细胞，RT-PCR、Western Blot检测转染效果。利用台盼蓝染色检测下调PGI对KG1α细胞增殖的影响。采用FCM检测下调PGI对细胞周期的影响。用人参皂苷Rh2处理转染细胞株及对照组和空白组，用Hochest染色检测PGI和人参皂苷Rh2对细胞凋亡的影响；用AntibodyAssay检测人参皂苷Rh2与下调PGI对mTOR通路中蛋白的影响；Western Blot检测蛋白PGI、mTOR、Raptor、Rag的表达。观察PGI基因与人参皂苷Rh2之间的关系。实验结果1、人参皂苷Rh2对白血病细胞株KG1α的增殖抑制作用最佳。2、FCM检测细胞周期：人参皂苷Rh2诱导KG1α后使细胞周期阻滞在G0/G1期，G0/G1期所占比例增加，空白对照组（26.78±3.14）％，药物组24h（29.26±2.31）%，48h（44.77±2.26）％。(P﹤0.05)3、FCM检测细胞凋亡：凋亡率空白对照组（2.37±0.02）%，药物组24h（8.37±0.15）%，48h（33.22±1.67）%。(P﹤0.05)4、Western Blot结果：人参皂苷Rh2上调P53、P21、CleavedCaspase-3的表达，下调CyclinD1的表达。5、Hochest染色和CCK-8结果显示：下调PGI基因的表达，可抑制KG1α细胞的增殖，并增加KG1α细胞对人参皂苷Rh2的敏感性。6、Antibody Assay显示：人参皂苷Rh2通过下调mTOR、AKT、AMPKα、PARP、Bad的表达影响细胞增殖。下调PGI后，蛋白PARP、State1、SAPK/JNK、Erk1/2的表达降低，P38表达上升。Western Blot结果显示：下调PGI通过抑制mTOR、Rag、Raptor的表达协同Rh2作用于人白血病KG1α细胞（P<0.05）。结论1、人参皂苷Rh2对白血病细胞株KG1α的作用最佳，通过阻滞细胞周期，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。2、人参皂苷Rh2通过上调P53、P21、Cleaved Caspase-3的表达，下调CyclinD1的表达，使细胞周期阻滞在G0/G1期，抑制KG1α细胞的增殖，并促进其凋亡。3、下调PGI的表达，可抑制KG1α细胞的增殖，并协同人参皂苷Rh2对人白血病KG1α细胞的作用。4、下调PGI主要通过mTOR通路来协同人参皂苷Rh2发挥作用。