一种新的血清芳香酯酶活性检测方法的建立及其应用

• 作 者: 周长邵
• 机 构: 福建医科大学
• 出 处: 福建医科大学
• 发表日期: 2003年01期
• 关键词: 芳香酯酶 方法学 肝脏疾病 肾病 心血管疾病

芳香酯酶（arylester hydrolase，EC3．1．1．2，ArE）是一种酯键水解酶，在20世纪50年代末就在人血清中被发现。在肝脏中ArE全部存在于微粒体片段，在血清中则主要与HDL结合。1979年，Lorentz首先报道该酶在肝脏疾病，特别是肝硬化和肝癌时明显降低。近年来，发现ArE具有的防止心血管疾病的作用，因而越来越引起人们的重视。许多实验结果表明ArE在肝脏疾病、肾脏疾病、心血管疾病、糖尿病等的发病机制、临床监控和预后判断中，均具有重要意义。 ArE底物较为广泛，其生理性天然底物至今仍不明。过去所用的底物有硝基酚酯、萘酚酯和乙酸苯酯。但硝基酚酯在酶最适pH时不稳定，水解效率差，反应速度慢；萘酚酯可被血清中其它酯酶水解，特异性差因而应用受到限制；乙酸苯酯水解所产生的苯酚，需在270nm处比色，不利于临床常规测定。同时它要求底物浓度较高，并且也易被血清中其它酯酶水解。由于ArE构象具有Ca²⁺依赖性，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定时常伴随的Ca²⁺丢失，使ArE发生了构象改变，即使加入额外的Ca²⁺也不能逆转这种改变，导致特异性抗ArE的单克隆抗体无法识别ArE表面的抗原决定簇因而不能与之结合。因此ELISA测得的酶浓度往往较化学方法偏低。继续寻找新的检测ArE的方法具有重要的意义和应用前景。本研究分为以下两部分:A:I，:检测新方法的建立采用有机合成的方法，合成新底物4一乙酞氧基一3一甲氧基一（。一硝基苯乙烯。由于该底物难溶于水而易溶于醇，本研究选择了对ArE活性抑制较弱的底物甲醇作为溶剂，底物在纯甲醇溶液中保存可稳定一个月以上。在阴8.6的‘fris一卜{Cl溶液中，酶活性较高，自发性水解亦相对较弱，其水解产物个轻基一3一甲氧基一。一硝基苯乙烯显红色，可在52Onm处直接比色测定。加入C澎‘、Na作为辅离子不但使酶活性增强，同时线性也较好。国内外报导的测定ArE的反应温度均为25℃，不利于目前的自动化仪器检测。本研究将反应温度调整为37℃，建立了液体双试剂全自动生化分析方法和手工方法，便于不同条件的单位应用。2.探讨ArE的临床应用对90例健康体检者和476例病人的血清进行了检测，并初步建立了参考值范围。对肝硬化、肝癌、肝炎患者在检测ArE的同时检测白蛋白（A比）胆碱醋酶（CllE）和直接胆红素（D一mL），对冠心病和高血压患者，同时检测高密度脂蛋白（HDIJ）。结果在肝硬化、肝癌、肝炎、肝移植、胃癌、肾移植、肾病综合征、肾炎、冠心病〔尸<0.01）和高血压（p<0.沥）时ArE均显著降低。其中肝硬化、肝癌、肝炎病人的血清ArE与白蛋白、胆碱酷酶和直接胆红素相关系数分别为0.872、0.840和一0，495，经t检验，其相关系数均具有高度统计意义（以0.（）l）。而冠心病和高血压患者ArE和高密度脂蛋白相关性较小（l〕>（）.05）。本文建立的方法简便，重复性较好，特异性较强，15.smmol/L甘油三醋、su/l血红蛋白、64.2林m（）}/L总胆红素对酶测定无干扰。可采用自动化和手工两种方法，适合不同条件的单位应用。ArE活力的测定为肝硬化、肝癌、肝炎、胃癌、肾移植、肾病综合征和肾炎等的诊断、治疗、预后提供了重要信息。本研究发现，Arl三和高密度脂蛋白较少相关（l〕>0.05），可能ArE只是与部分、、p（）AI结合。八:E在HDL抗动脉粥样的作用有待进一步研究。