转基因天山雪莲类黄酮成分及抗肿瘤活性分析

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天山雪莲是生长在我国高海拔地区的传统名贵的药用植物,富含黄酮类化合物。食管癌是常见的恶性肿瘤之一,很难治愈,严重影响着人们的生活质量。而有研究报道从很多植物中获得的花青苷对食管癌都具有较强的抗性。因此,本研究以转入花青苷合成调控基因(PAP1和LC)后呈现红色的天山雪莲愈伤组织为材料,从化学成分、药理活性和分子生物学三个方面系统的研究转基因和非转基因两种天山雪莲愈伤组织醇提物对人食管癌细胞CaEs-17的抗肿瘤活性,为高抗肿瘤活性天山雪莲育种提供理论支持,为天山雪莲的抗肿瘤功效得以充分利用提供技术支持。所得主要研究结果如下:(1)对两种天山雪莲愈伤组织的总黄酮含量进行检测,结果显示转基因天山雪莲愈伤组织的总黄酮含量(8257.88±759.20)mg·kg-1 DW是非转基因愈伤组织(3039.70±223.48)mg·kg-1 DW的2.72倍。(2)对两种天山雪莲愈伤组织中单体酚的种类和含量进行分析,结果显示两种天山雪莲愈伤组织中单体酚的种类几乎相同,但是转基因天山雪莲愈伤组织中的单体酚含量较高,且在转基因愈伤组织中检测到了使其呈现红色的矢车菊素半乳糖苷(Cyanidin-galactoside),而非转基因愈伤组织中未检测到。(3)采用CCK-8法和细胞形态学观察检测两种天山雪莲愈伤组织醇提物对人食管癌CaEs-17细胞的增殖抑制作用,结果表明,转基因天山雪莲愈伤组织醇提物对CaEs-17细胞的增殖抑制作用较强,其IC50值(0.2874 mg·mL-1)比非转基因愈伤组织醇提物的IC50值(0.3903 mg·mL-1)低26.4%。荧光倒置显微镜观察到人食管癌CaEs-17细胞的生长明显受到抑制,细胞形态发生明显变化,细胞体积缩小,间距变大,相互分离,细胞核高度固缩,细胞成片死亡。(4)对两种天山雪莲愈伤组织醇提物诱导人食管癌CaEs-17细胞凋亡的作用进行分析。流式细胞仪分析结果显示,两种天山雪莲愈伤组织醇提物对CaEs-17细胞均具有明显的细胞凋亡诱导作用,且均呈浓度依赖性,但转基因愈伤组织醇提物对CaEs-17细胞的凋亡诱导作用较强。(5)运用RT-PCR检测两种天山雪莲愈伤组织醇提物对相关凋亡基因Bcl-2和Bax表达量的影响。结果显示两种天山雪莲愈伤组织醇提物都可以上调促凋亡基因Bax的表达量,呈不断上升的趋势,下调抑凋亡基因Bcl-2的表达量,呈不断下降的趋势,但转基因愈伤组织醇提物的调控作用更加显著。综上所述,与非转基因愈伤组织相比,转基因天山雪莲愈伤组织醇提物对人食管癌细胞CaEs-17的抗肿瘤活性显著提高,这与转基因愈伤组织中矢车菊半乳糖苷及其代谢相关类黄酮化合物的含量的大幅度增加有很大关系。
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