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目的：探讨保罗样激酶1(PLK1)和p53蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其临床意义。构建PLK1—shRNA重组质粒，并转染食管鳞癌Eca—109细胞株，探讨重组质粒对Eca—109细胞株PLK1mRNA及蛋白的抑制作用，进一步对p53mRNA及蛋白表达的影响。
方法：采用免疫组织化学法分别检测87例食管鳞状细胞癌、53例癌旁组织及42例正常食管黏膜组织中PLK1及p53蛋白的表达，并分析两者的表达水平与临床病理因素的关系。构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)，将该干扰质粒转染到人食管鳞癌细胞Eca—109中，用Real—time PCR分析检测PLK1基因和p53基因mRNA表达水平的变化，采用Western blot技术分析检测PLK1基因和p53基因蛋白表达水平的变化。
结果：(1)PLK1蛋白在食管鳞状细胞癌、癌旁组织及正常黏膜组织中的阳性表达率分别为57．5％、50．9％和26．2％；p53蛋白的阳性表达率分别为48．3％、52．8％和23．8％。食管鳞癌组织PLK1、p53阳性表达率与正常黏膜组织比较差异均有统计学意义(x2分别为11．119和7．047，P<0．05)，癌旁组织PLK1、p53阳性表达率与正常黏膜组织比较差异均有统计学意义(x2分别为5．982和8．223，P<0．05)，两者在食管鳞癌组织与癌旁组织比较差异均无统计学意义(x2分别为0．567和0．273，P>0．05)。(2)食管鳞癌组织中PLK1和p53的蛋白表达与淋巴结转移及TNM分期密切有关(P<0．05)，而PLK1的蛋白表达还与肿瘤浸润深度有关(P<0．01)。(3)PLK1和p53在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈负相关(r=—0．286，P<0．01)。(4)酶切鉴定和DNA测序分析显示，PLK1靶向RNA干扰重组质粒构建成功。(5)转染后48h和72h，转染效率分别是65％和55％。(6)Real—time PCR结果显示，转染RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)后，PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了72．8％和58．5％(P<0．05)；PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的p53基因mRNA表达分别升高了61．3％和72．9％(P<0．05)。(7)Western blot结果显示，转染RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)后，PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的PLK1基因蛋白表达分别降低了67．6％和56．1％(P<0．05)；PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的p53基因蛋白表达分别升高了46．6％和54．1％(P<0．05)。
结论：PLK1和p53蛋白表达与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关，联合检测PLK1和p53蛋白对食管鳞癌的预后判断具有重要意义。干扰重组质粒PLK1—shRNA能有效抑制人食管鳞癌Eca—109细胞株PLK1mRNA和蛋白的表达，从而有效地升高p53mRNA和蛋白的表达，说明PLK1基因抑制p53基因在Eca—109细胞中的表达，为进一步研究以PLK1为靶点的抗肿瘤治疗奠定了基础。