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目的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）为感染常见的致病菌。万古霉素作为治疗MRSA感染的首选药物,在临床上广泛应用,使得最低抑菌浓度（MIC）呈现高度漂移的现象。因此采用药物联合应用策略,以降低万古霉素用量,缩小突变选择窗（MSW）,减少耐药菌株的产生。聚合酶链反应（PCR）被公认为检测MRSA的“金标准”,通过采用PCR反应,对该地区MRSA进行SCCmec分型研究,可探讨该当前地区MRSA的主要型别,为临床治疗MRSA感染、预测耐药菌株的流行提供依据和对策。研究方法2018年1月至2018年11月,收集临沂市人民医院门诊及住院患者各类送检标本中分离得到的MRSA菌株83株（剔除同一患者重复分离的菌株）。1、通过微量肉汤稀释法及棋盘稀释法,测定万古霉素与哌拉西林/他唑巴坦单用及联用时,对MRSA的标准菌ATCC43300及83株临床分离MRSA菌株MIC值,并计算部分抑菌浓度指数（FICI）;根据在不同药物浓度、不同时间点的菌落计数,绘制MRSA的标准菌ATCC43300的时间-杀菌曲线。2、采用琼脂稀释法,测定万古霉素与哌拉西林/他唑巴坦单用及联用时,对MRSA的标准菌ATCC43300及83株临床分离MRSA菌株的防耐药突变浓度（MPC）,并计算选择指数（SI）。3、通过PCR扩增法及凝胶电泳法,对收集的83株临床分离MRSA菌株进行mec A基因、fem A基因及SCCmec基因分型研究,并随机挑取2株SCCmec基因各分型的阳性菌株的PCR扩增产物进行测序,将测序结果与Gene Bank数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）上公布基因序列进行BLAST对比分析。结果1、对MRSA标准菌株ATCC43300,万古霉素与哌拉西林/他唑巴坦单用时MIC值分别为:MICVAN(0.5μg·ml-1)、MICTZP(128/16μg·ml-1);联用时MIC值为:MICVAN+TZP(0.125+32/4μg·ml-1)。单用时MPC值分别为:MPCVAN(16μg·ml-1)、MPCTZP(4096/512μg·ml-1);联用时MPC值为:MPCVAN+TZP(2+521/64μg·ml-1)。联合用药后,各抗菌药物的MIC值、MPC株较单用时明显降低,且MSWVAN和MSWTZP均缩窄,SIVAN和SITZP均降低2倍,FICI值为0.5,表现为协同抗菌作用。时间-杀菌曲线实验得出:当两药单独使用的用药浓度超过MIC值时,有一定的抗菌活性;但当联合用药时,1/2×MIC浓度的药物即可表现出一定的抗菌活性,且抗菌效果均明显高于单独用药时的抗菌效果（P<0.01）。2、对83株MRSA临床分离菌株,万古霉素与哌拉西林/他唑巴坦单用时MIC值范围分别为:MICVAN(0.25～2μg·ml-1)、MICTZP(8/1～512/64μg·ml-1);联用时MIC值范围分别为:MICVAN(0.0625～0.5μg·ml-1)、MICTZP(4/0.5～256/32μg·ml-1)。单用时的MPC值范围分别为:MPCVAN(4～64μg·ml-1)、MPCTZP(128/16～8192/1024μg·ml-1);联用时MPC值范围分别为:MPCVAN(0.5～8μg·ml-1)、MPCTZP(16/2～1024/128μg·ml-1)。联合用药后,对83株临床分离MRSA菌株的MSWVAN和MSWTZP均缩窄,SIVAN和SITZP均显著降低,且具有统计学意义（P<0.01）。3、采用PCR方法,对83株MRSA分离菌株的进行各基因检测,结果显示:MRSA携带mec A基因、fem A基因阳性率均为100%（83/83）;83株MRSA分离菌株中,SCCmec II型检出率为13.25%（11/83）;SCCmec III型检出率为9.64%（8/83）;SCCmec IVa型检出率为72.29%（60/83）;未分型菌株检出率为4.82%（4/83）,由此可发现当前该地区MRSA感染主要以SCCmec IVa型的CA-MRSA感染为主。结论1、万古霉素联合哌拉西林/他唑巴坦对MRSA菌株的体外抗菌活性,主要表现为协同作用。2、万古霉素联合哌拉西林/他唑巴坦对MRSA菌株的MIC值、MPC值以及SI值较单度使用时明显降低,MSW变窄,从而能够有效地控制突变耐药菌株的产生。3、当前该地区MRSA感染主要以SCCmecIVa型CA-MRSA感染为主。