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背景:视神经损伤后能否再生是大家普遍关心的热点,目前国内外对于急性视神经损伤进行了深入研究,而有关慢性视神经损伤的研究却罕见报道。临床上眼眶肿瘤因长期压迫常可引起慢性视神经损伤,导致视功能障碍。肿瘤摘除术后如何修复损伤的视神经,达到功能重建,提高术后患者的生存质量,具有重要意义。想要有效地促进视神经慢性损伤后的再生,就应明确慢性视神经损伤发生发展的病理机制和过程,其中神经胶质细胞在这一过程中扮演着重要角色。目的:模拟眼眶肿瘤建立慢性视神经受压损伤动物模型,研究神经胶质细胞、视网膜神经节细胞在视神经慢性损伤后不同阶段的变化情况,分析神经胶质细胞视神经损伤中对视网膜神经节细胞的影响关系并阐明其作用机制,为将来探索适合眶内视神经损伤后再生修复所需的微环境提供依据。方法:选取健康成年兔24只,雌雄不限。随机分为假手术组、A组(压迫2周,2w)、B组(压迫2周解压2周,2+2w)、C组(压迫4周,4w)、D组(压迫4周解压4周,4+4w)和E组(压迫8周,8w),每小组4只。所有实验动物右眼为手术眼,左眼作空白对照。在3%戊巴比妥钠全麻下外侧开眶将2ml容积球囊放于球后视神经颞侧,术后充盈造影剂并随时间延长逐渐增量压迫视神经建立兔眶内视神经慢性损伤动物模型。术后行FVEP检查、CT扫描、眼底照相,损伤不同阶段处死动物取下眼球及视神经作病理切片HE染色及免疫组化染色光镜检查、凋亡检测、RT-PCR检测基因CNTF和GAP-43表达谱。结果:1.FVEP结果:随着兔视神经受压时间的延长,FVEP波形差异明显,出现异常波形,表现为低平扁阔及不规则形,P1、N1和P2的潜伏期延长、波幅降低。与压迫前比,压迫2w时差异不显著(P>0.05),压迫4w(P<0.05)及8w时(P<0.01)差异有意义,4+4w组与4w组之差异无统计学意义(P>0.05)。2.HE染色:(1)视网膜:假手术组视网膜轻度水肿增厚;2w组及4w组视网膜轻度变薄,4w组RGCs胞核略稀疏;8w组可见各层细胞核稀疏杂乱;解压迫组视网膜增厚,细胞排列整齐。(2)视神经:假手术组无明显变化; 2w组ON细胞数量减少,纤维束排列紊乱,束膜破坏; 4w组细胞数量开始明显增加,但视神经束仍然紊乱;8w组见大量杂乱无章的细胞核,纤维束结构不清;解压迫组细胞增多,但纤维束仍然排列紊乱。3.免疫组化染色:压迫2周和压迫4周后视神经GFAP含量均明显高于对照组,压迫8周后GFAP的含量仍持续高水平。与压迫2周及4周相比,解除压迫后(2+2w和4+4w)GFAP有明显下调,但仍高于对照组。4.凋亡检测:随着视神经受压时间的延长,可见视网膜RGCs层着色的凋亡细胞逐渐增多,并与压迫时间呈正相关关系。5.基因检测:空白及假手术组低表达CNTF和GAP-43,压迫2周后即可见表达上调(P<0.01),随着压迫时间延长,两种基因均见表达逐渐增高(P<0.01)。解压迫组有所下调,但仍高于对照组(除2+2w组GAP-43外P<0.01)。结论:本课题通过模拟眼眶肿瘤压迫视神经造成慢性损伤,用手术植入方法在兔眼眶内放置导尿管球囊,随时间延长向球囊充盈造影剂逐渐加量建立动物模型并进行研究,得出以下结论:1.以哺乳动物兔作为实验对象,成功建立眶内视神经慢性受压损伤动物模型,为临床上进一步探索视神经慢性损伤后的保护措施及治疗方法提供宝贵资料。2.FVEP监测视力方便易行,能比较客观地反映视路损伤情况,可作为兔眼眶慢性视神经损伤的检测手段。3.视神经损伤后神经节细胞变性死亡,视网膜变薄,细胞紊乱,视神经纤维数量减少,功能障碍,并随损伤加重而明显。去除损伤后视网膜和视神经有一定的自身修复能力。4.视神经受压后胶质细胞变性死亡,数量减少,随后反应性增生,早期对促进RGCs存活和再生有积极意义,随着胶质细胞过度增生,则阻碍了RGCs及其轴索的再生。5.调控胶质细胞反应,限制过度增生,有望为视神经损伤后的治疗开辟一条新的途径。