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第一部分 IGFBP－3对胶质瘤细胞株U87MG增殖的作用及调控ERK信号通路的研究 目的：探讨IGFBP－3对胶质瘤细胞增殖的影响及可能的分子调控机制。 方法：选用低表达IGFBP－3的胶质瘤细胞株U87MG，分成三组即未处理组(Control)、转染pCMV-myc质粒组(NC)、转染pCMV-IGFBP-3质粒组(Ⅰ)，瞬时转染U87MG细胞株，并于细胞培养箱内孵育48h后，提取细胞总RNA和细胞总蛋白，采用RT-qPCR技术和Western blot方法检测胞内ERK1/2的mRNA和蛋白表达水平、ERK1/2的磷酸化水平和抗凋亡蛋白Bcl-XL的表达情况。同时应用MTT法检测经IGFBP-3胞外刺激U87MG细胞株后细胞增殖情况及AnnexinV-FITC/PI双染色法于流式细胞仪上检测转染pCMV-IGFBP-3质粒后细胞的凋亡情况。 结果：在U87MG细胞中过表达IGFBP-3后，胞内ERK1/2的mRNA和蛋白水平无明显变化，但磷酸化明显增强，下游抗凋亡Bcl-XL的表达上调。MTT显示当IGFBP-3的浓度为50ng/ml和500ng/ml时，细胞增殖显著增加(分别为p<0.05和p<0.01)，且ERK1/2的磷酸化随IGFBP－3刺激时间的延长呈逐渐增强趋势，抗凋亡蛋白Bcl－XL表达随之增加。凋亡实验未观察到细胞凋亡的变化。 结论：IGFBP－3无论在胞内还是胞外都可以促进ERK信号通路的活化，上调下游靶基因Bcl－XL的表达，从而促进胶质瘤细胞的增殖。该结果表明在胶质瘤细胞中IGFBP－3具有自身独特的生物学功能。 第二部分 GalNAc-T14对U87MG细胞株凋亡的作用及调控ERK信号通路的研究 目的：探讨GalNAc-T14对U87MG细胞凋亡的作用及可能的分子调控机制。 方法：本研究成功构建pcDNA3.1-GalNAc-T14的真核表达载体。将U87MG细胞分成三组即未处理组(Control)、转染pcDNA3.1(+)质粒组(NC)、转染pcDNA3.1-GalNAc-T14质粒组(T14)，瞬时转染U87MG细胞株，并于细胞培养箱内孵育48h后，提取细胞总RNA和细胞总蛋白，采用RT-qPCR技术和Western blot方法检测胞内ERK1/2的mRNA和蛋白表达水平及ERK1/2的磷酸化水平；抗凋亡蛋白Bcl-XL的表达情况。同时应用AnnexinV-FITC/PI双染色法经流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。 结果：在U87MG细胞中过表达GalNAc-T14后，胞内ERK1/2的mRNA和蛋白水平明显下降，但其磷酸化无明显变化；Bcl-XL的表达明显下调。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示：(Control)组和(NC)组的凋亡率分别为3.48％和4.42％，而(T14)组的凋亡率达到40.83％，细胞凋亡明显增加。 结论：GalNAc-T14可以抑制ERK1/2的表达，下调下游靶基因Bcl-XL的表达，从而促进胶质瘤细胞的凋亡。进一步认识了GalNAc-T14在肿瘤细胞中发挥生物学功能的分子机制。 第三部分 GalNAc-T14调节IGFBP-3的生物学功能的研究 目的：探讨U87细胞中GalNAc-T14对IGFBP-3的生物学功能的影响。 方法：将U87MG细胞分成四组即ppCMV/pcDNA组(Control)、转染pCMV-IGFBP-3/pcDNA3.1(+)组(BP-3/pcDNA)、转染pcDNA3.1-GalNAc-T14/pCMV-myc组(T14/pCMV)、转染pCMV-IGFBP-3/pcDNA3.1-GalNAc-T14质粒组(BP-3/T14)，瞬时转染U87MG细胞，于培养箱内分别培养0、12h、24h、48h、72h、96h。采用MTT法检测各组细胞随孵育时间的增殖变化。采用AnnexinV-FITC/PI双染色法经流式细胞仪检测共转染pCMV-IGFBP-3/pcDNA3.1-GalNAc-T14质粒后细胞的凋亡情况。 结果：与pCMV/pcDNA组(Control)，IGFBP-3具有明显的促增殖作用；GalNAc-T14具有明显的促凋亡作用；而共转染二者后细胞活性较IGFPB-3单独作用时明显降低。凋亡实验结果显示共表达IGFBP-3和GalNAc-T14后细胞凋亡无明显增加。 结论：在胶质瘤细胞中，GalNAc-T14可以抑制IGFBP-3的促增殖作用，表明其参与调节IGFBP-3的生物学功能。