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第一部分scFvCD20负载antagomiR155的构建及其对电鳗AchR刺激C57BL/6小鼠B细胞的影响目的：构建scFvCD20单链抗体并负载antagomiR155,观察其对电鳗AchR刺激C57BL/6小鼠B细胞增殖、成熟及抗AchR特异性抗体分泌的影响。方法：根据Genebank小鼠CD20基因信息,设计末端带有半胱氨酸残基的小鼠CD20单链抗体即scFvCD20cys,通过商品化偶联肽段cys-9R与miR155拮抗剂即antagomiR155偶联,同时针对antagomiR155设计对照antagomiRNA;免疫磁珠分选小鼠脾脏T细胞和B细胞,首先在B细胞的培养基中加入FITC标记的scFvCD20偶联的antagomiR155,培养后流式检测B细胞对其摄取率,荧光定量PCR检测B细胞miR155的表达水平；验证其有效性；然后将分选的小鼠脾脏T细胞和B细胞按照1：3的比例共培养,在培养基中加入电鳗AchR(Torpedo AchR, T-AchR),分为空白组、实验组和对照组,在实验组中加入scFvCD20偶联的antagomiR155,而在对照组中加入对照antagomiRNA,培养后流式细胞仪检测B细胞表面CD40、 CD80、CD86、IgM和IgD的表达,Western blot检测BAFF-R信号通路相关分子的表达；ELISA检测上清液中AchR特异性总IgG、 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3的分泌水平。结果：流式细胞仪检测证明scFvCD20偶联antagomiR155可与小鼠B细胞表面CD20高效结合(结合率达52.47%),证实了该单链抗体的正确性和有效性。荧光定量PCR结果证明scFvCD20偶联antagomiR155可显著降低小鼠B细胞miR155的表达水平,证实了antagomiR155序列的准确性。在进一步的T、B细胞共培养中,流式检测证明抑制miR155可显著降低B细胞表面CD80、CD86和IgM的表达水平,antagomiR155可下调BAFF-R的表达水平、抑制NIK的磷酸化并导致NF-kB向核内转位减少,最终导致T-AchR特异性总IgG、IgG2a和IgG2b分泌的显著减少。结论：本研究成功构建了小鼠scFvCD20单链抗体,将其与antagomiR155偶联后可有效被小鼠B细胞摄取并显著降低其miR155的水平,有效地抑制了T-AchR特异性抗体的分泌,为体内沉默miR155的表达来治疗EAMG奠定了基础。第二部分scFvCD20负载antagomiR155治疗EAMG小鼠的疗效观察目的：用scFvCD20负载antagomiR155腹腔注射EAMG小鼠,观察其对EAMG发病的影响,探讨其可能的作用机制。方法：首先建立EAMG动物模型,36只C57BL/6小鼠,SPF级,随机分为CFA组(n=9)和EAMG模型组(n=27),其中EAMG组又随机分为3个亚组(n=9,9,9),以200μg tAchR溶于100μl生理盐水(normal saline, NS)中,然后与等体积CFA混匀制成抗原乳剂,分别于C57BL/6小鼠双后肢足垫和双肩部皮下注射50μl抗原乳剂制成EAMG模型,然后于初次免疫后第30天和第60天各重复免疫一次。在第70天、73天、76天和79天时,分别用scFvCD20-antagomiR155腹腔注射EAMG小鼠,同时使用scFvCD20-scramble miRNA作为干预对照,每天观察EAMG临床评分的变化,收集小鼠尾静脉血检测AchR特异性抗体的水平,分离脾脏流式细胞仪检测B细胞亚群的比例。结果：scFvCD20-antagomiR155可显著改善EAMG小鼠的临床症状,而scFvCD20-scramble miRNA对EAMG小鼠的病情无明显影响。ELISA结果显示抑制miR155可减少小鼠总IgG和IgG2a的分泌；并显著减少脾脏腹膜B细胞和边缘区B细胞的比例p<0.001；p<0.05)。结论：scFvCD20负载antagomiR155可显著改善EAMG小鼠的临床症状,miR155在EAMG的发病中发挥了重要的作用,miR155有望成为临床治疗MG的新的靶点。第三部分miR155在重症肌无力患者外周PBMCs中的表达目的：通过检测MG患者及正常对照外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中miR155的表达,探讨其在MG发病机制中的作用。方法：收集MG患者及正常对照外周静脉血,qPCR检测PBMCs中miR155的表达水平,spearman相关分析miR155表达水平与MG患者临床评分的相关性。结果:MG患者外周血PBMCs中miRl55的表达显著高于正常对照,其表达与MG患者的QMG评分呈正相关。结论：MG患者miRl55的表达与动物实验结果一致,证明miRl55在MG发病中发挥了重要的作用。