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随着胚胎工程技术的深入研究和商业化推广应用,牛卵母细胞体外成熟、体外受精技术成为解决体外生产胚胎紧缺问题的重要途径之一.该研究在总结前人研究的基础上,应用体外培养技术对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外发育作了进一步研究,旨在建立健全一套完整的体外生产高产优质牛胚胎的高新技术体系,为胚胎工程和生产实践提供技术操作规程和方法,为理论研究积累资料.研究结果如下:1.从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数;卵巢保存时间在2h以内最好,最晚不超过6h;牛卵巢表面卵泡卵母细胞的体外成熟时间以22~24h最佳,而牛卵巢内卵母细胞的体外成熟培养时间可延长1~2h.利用活体受卵技术可生产血缘清楚、遗传品质优秀的胚胎.2.30~39℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9％)和卵裂率(34.4％)最高,与2~8℃(16.7％、0％)、20~29℃(54.1％、31.7％)两组差异显著(P<0.05).3.用四孔培养板800μl培养液与微滴(50μl)培养牛卵母细胞,其体外成熟率(61.1％vs62.9％)和卵裂率(34.4％vs35.2％)均无显著差异性(P>0.05).4.采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为69.2％、64.3％),无显著差异性(P>0.05).5.直径2~6mm卵泡中的卵母细胞成熟率(72.1％)最高,与直径小于2mm(58.4％)、6~8mm(56.4％)及大于8mm(35.0％)卵泡中的卵母细胞组差异显著.6.成熟培养基中添加10％的新鲜牛卵泡液(bFF)对牛卵母细胞的体外成熟有促进作用,但高浓度的bFF(20％、30％)则抑制牛卵母细胞的体外成熟.7.卵丘-卵母细胞复合体的质量影响卵母细胞的体外成熟,A、B、C三级卵母细胞成熟率分别为86.1％、66.3％、35.6％,卵裂率分别为42.8％、31.9％、10.5％,差异均显著(P<0.05).8.M199是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199+50IU/ml LH+100IU/ml FSH+1μg/ml 17β-E<,2>都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为69.4％、67.5％,卵裂率分别为35.4％、42.7％).9.BO液上浮法和TALP液Percoll法是牛精子洗涤和体外获能的理想方法,受精后卵裂率分别为56.1％、57.6％,无显著差异性(P>0.05).10.输卵管上皮细胞是克服牛胚胎发育阻断理想的共培养细胞(囊胚发育率为32.4％);分步培养适宜于研究牛早期胚胎的体外发育(8-细胞发育率为60.4％,囊胚发育率为35.5％).