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内质网是细胞里面一个具有重要功能的膜性细胞器，其中一个重要的作用就是参与蛋白质的正确折叠。当短时间内有大量的未折叠或错误折叠的蛋白质涌入内质网，超过了内质网的折叠能力时就会导致内质网处于应急状态。病毒在复制子代的过程中，会短时间在细胞内产生大量的病毒蛋白，新生成的病毒蛋白大量涌入内质网便会引发内质网应激。内质网应激信号如若不能及时去除，宿主细胞会启动下游的一系列信号转导通路，称为非折叠蛋白反应(unfolded protein response，UPR)，非折叠蛋白反应包括三条相互独立又互相联系的通路， IRE1是其中一条。IRE1包括两个亚型，即:IRE1α和IRE1β。在本课题中主要探讨了IRE1α应激信号通路与HSV-1病毒复制过程中相互作用的机制，系统阐述了HSV-1在复制过程中对IRE1α应激信号通路的影响以及操控和利用IRE1α的两种激酶活性利于其自身复制的微妙机制;本课题还初步探究了可能与IRE1α存在相互作用的病毒蛋白，从内质网应激角度完善对HSV-1复制过程与宿主相互作用的认识。本文主要的研究内容包括以下几个部分: 一、HSV-1病毒感染晚期特异性的上调IRE1α基因和磷酸化蛋白的表达量。 关于HSV-1与IRE1α应激信号通路之间的关系研究，多集中在IRE1α的核酸内切酶方面，通过检测剪切型的XBP1的基因表达水平间接反映IRE1α的激活情况。我们在研究HSV-1病毒对IRE1α应激信号通路的影响时，从IRE1α本身的基因及蛋白表达水平总体上反映对这条通路的影响。通过抑制病毒复制后对该通路的影响，证实这种调节是病毒感染所特异性引起的。后面通过IRE1α的干扰和过表达进一步证明维持一定水平的IRE1α对病毒复制是必要的，而过表达IRE1α并不能增加病毒的复制。 二、HSV-1操控和利用IRE1α应激信号通路利于其复制。 研究已经证实，在IRE1α胞浆一侧具有双功能激酶活性，即核酸内切酶和激酶活性。当我们证实在病毒感染晚期上调了IRE1α基因和磷酸化的蛋白水平后，进一步想了解IRE1α下游的核酸内切酶和激酶的活性变化情况。首先，我们的研究结果提示，在病毒感染过程当中IRE1α的核酸内切酶活性并未激活。后面用调节IRE1α核酸内切酶活性的化合物处理细胞后的结果进一步证实，病毒感染过程中非但不仅仅是不激活核酸内切酶活性，而且是抑制该活性，进一步的实验结果提示该通路激活可以抑制病毒的复制。我们通过过表达剪切型的XBP1质粒对病毒复制的影响以及抑制XBP1下游信号通路的化合物对病毒复制的影响进一步验证了这一结论。接着我们考察了病毒感染后IRE1α激酶的变化情况。通过引入激酶活性特异性的抑制剂和过表达激酶突变的IRE1α质粒，我们发现抑制IRE1α的激酶活性显著抑制HSV-1病毒的复制。IRE1α激酶下游可以激活JNK信号通路。JNK通路对于HSV-1病毒的复制非常重要。我们利用RNAi以及IRE1α激酶活性抑制剂均发现可以抑制JNK信号通路的激活。因此，我们推测病毒感染晚期上调IRE1α基因及蛋白表达的主要目的是为了激活IRE1α的激酶活性，从而激活其下游的JNK信号通路，从而利于其感染及复制。 三、ICP0和gD可能是调节IRE1α活性的病毒蛋白。 既然病毒如此巧妙的操控和利用IRE1α应激信号通路利于其复制。接下来我们通过筛选在病毒复制过程中作用重要蛋白，初步探究了可能调节IRE1α活性的病毒蛋白。虽然我们发现ICP0和IRE1α并没有直接的共定位存在，但是干扰ICP0可以显著增加IRE1α的核酸内切酶活性。因此推测在病毒复制的开始阶段，ICP0可能调节IRE1α的核酸内切酶活性。 gD是病毒复制晚期的标志性蛋白，它对病毒在细胞间扩散有重要作用。本研究发现gD和IRE1α共定位在一起，推测可能gD可以激活IRE1α的激酶活性从而激活下游的JNK信号通路利于病毒的复制。