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去甲酰化酶(peptide deformyalse),一种新的抗菌药物设计靶蛋白,已经成为目前抗菌药物研究的热点.在钩端螺旋体全基因组测序完成之后,我们从其基因组序列中鉴定并初次克隆了去甲酰化酶基因.基因全长537bp,编码169个氨基酸.克隆到表达载体pET22b上的pdf基因,在宿主菌BL21(DE3)中得到高效表达.经过DEAE离子交换和Superdex分子筛纯化后,在1L培养基中可以得到近60mg的PDF蛋白.并且我们在条件A(4M甲酸钠)和条件B[18％PEG4000(w/v)和0.2M(NH<,4>)SO<,4>]中得到了可以衍射的晶体,FormA晶体的初步数据显示空间群为P4<,1>2<,1>2或P4<,3>2<,1>2,分辨率为3A.同时对Li PDF进行了较深入的酶学分析,包括热稳定性半衰期、不同pH条件下酶活性的分析、原子吸收光谱分析等等.Li PDF在下面几个方面具有新的性质:1)在溶液状态下纯化的Li PDF是一个二聚体(二聚体性质在晶体学中也已得到了验证),在E.coli中体外活性状态下PDF却为单体性质;2)原子吸收光谱表明,Li PDF是一个含Zn<2+>的金属酶,同其它含Fe<2+>的PDF相比较,整体酶学特征上显示了高度的相似性,但仍具有一些生化上的差异,尤其反映在Li PDF酶纯化过程中相对热稳定性上.去甲酰化酶序列中保守基序2中的两个组氨酸和保守基序3中的一个半胱氨酸都是同金属离子配位结合的保守残基.我们对Li PDF中的Cys102进行了定点突变.C102S和C102A两者都没有活性,表明了在Li PDDF中Cys102残基同样具有不可替代性.依赖于同源序列分析的结果,保守基序1和保守基序2之间8个氨基酸插入区(R<,70>Y<,71>P<,72>G<,73>T<,74>P<,75>D<,76>V<,77>)的切除没有显示出在酶活性上的差别.做为抗菌药物设计的靶蛋白,聚乙二醇(PEG)和放线酰胺素(Actinonin)作为抑制剂对Li PDF同样具有抑制效果,抑制常数分别为44mM和250nM,抑制效应稍弱于在E.coli PDF中的抑制作用.以不同分子量的聚乙二醇(PEG)作为沉淀剂都可以筛选得到Li PDF的晶体,但优化条件较为困难,目前已在条件(2.0M NaCl,10％w/v PEG6000)中得到较良好的Li PDF/Actinonin抑制剂复合物的晶体(0.3 x 0.15mm),衍射和进一步结构的解析正在进行之中.