猪骨骼肌MyHC-Ⅱb基因上调表达的分子机制研究

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哺乳动物骨骼肌是由各种不同类型的肌纤维镶嵌而成的,而不同类型肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MyHC)的表达情况是造成不同类型肌纤维的主要原因。目前已知的肌球蛋白重链家族包含8种亚型,其中MyHC-IIb在商品猪中的表达量要显著高于其在中国地方猪种中的表达量,然而造成这种差异表达的内在机制尚且无人研究。本研究使用qRT-PCR、C2C12细胞转染、荧光素酶检测以及Western Blot等方法,对商品猪中MyHC-IIb基因表达上调的因素进行了初步的分析。结果如下:1使用荧光定量PCR的方法比较了莱芜猪(n=5)和大长杂交猪(n=4)背最长肌中MyHC-IIb mRNA的表达情况,发现MyHC-IIb mRNA在大长杂交猪中的表达量显著高于其在莱芜猪中的表达量(P=0.013<0.05)。2删除实验结果表明从转录起始位点上游-1024bp删除到-187bp之后,MyHC-IIb表达量显著下降,分析发现在这段启动子区域内存在三个E-box序列,分别突变这3个E-box序列,结果使得MyHC-IIb表达量都显著下降(P=0.036<0.05)。3另外,在MyHC-IIb上游启动子区-1398bp处发现一个G>T的突变,检测了64头莱芜猪发现该位点全部为GG型,65头长白猪中13头为GG型(~20%),16头为TT型(~24.6%),36头为GT型(~55.4%),突变该位点(G>T),发现突变之后有增加MyHC-IIb表达的趋势。4Western Blot的结果显示:转录因子MyoD在大长杂交猪中的表达量比其在莱芜猪中的表达量高,但是两猪种间表达量差异并不显著(P=0.136);而转录因子Myf-5在大长杂交猪中的表达量极显著高于其在莱芜猪中的表达量(P=0.0036<0.01)。本研究验证了E-box对于猪MyHC-IIb基因高表达的重要性,同时也表明转录因子Myf-5在调控猪MyHC-IIb基因转录过程中具有重要的作用。
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