RNA干扰PRN对人卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖和化疗的影响

• 作 者: 魏苏
• 机 构: 徐州医科大学
• 出 处: 徐州医学院 徐州医科大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 卵巢癌 骨桥蛋白 真核表达 紫杉醇 RNA干扰

目的:把构建成功的骨桥蛋白特异性真核表达载体转染卵巢癌细胞HO-8910PM,通过骨桥蛋白的表达鉴定转染骨桥蛋白特异性siRNA(small interfereRNA)真核表达载体(pSilencer3.1/OPN-shRNA)对卵巢癌细胞系HO-8910PM的影响;并观察转染后的卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖及对化疗药物紫杉醇治疗的影响,为探索卵巢癌基因治疗提供理论依据。　　
方法:本实验以脂质体法将骨桥蛋白特异性siRNA真核表达载体转染卵巢癌细胞HO-8910PM,48h后用Western blotting技术检测重组质粒组、空质粒组和空白对照组中卵巢癌细胞内OPN蛋白水平的表达情况;骨桥蛋白特异性真核表达载体转染卵巢癌细胞株HO-8910PM后,采用偶氮四唑蓝(MTT)法测定连续5天细胞的增殖情况并绘制曲线图;经转染后的HO-8910PM细胞加入紫杉醇(四个浓度梯度),采用MTT法,在加药后的24小时测定细胞增殖情况。　　
结果:;　　
1.骨桥蛋白特异性真核表达载体转染卵巢癌细胞株HO8910PM后48小时骨桥蛋白表达下降,差异有统计学意义(同空质粒组、空白对照组相比P＜0.05):空质粒组与空白对照组相比差异无统计学意义(P≥0.05)。　　
2.转染后连续5天OD值,重组质粒组与空质粒组,空白对照组三组比较第1天差异无统计学意义(P≥0.05),2-5天差异有统计学意义(P＜0.05)。空质粒组与空白对照组比较1-5天差异无统计学意义(P≥0.05)。　　
3.相同浓度紫杉醇处理24h,重组质粒组与空质粒组、空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。不同紫杉醇浓度处理24h,重组质粒组细胞增殖抑制均随紫杉醇浓度的增加而增加。结果提示OPN干扰和紫杉醇有一定的协同抑制卵巢癌细胞HO-8910PM生长的作用。而且随着紫杉醇浓度的增加,细胞的增殖抑制效果越明显,说明紫杉醇对特异性干扰后的细胞增殖抑制具有剂量依赖性的。　　
结论:;　　
1.构建的骨桥蛋白特异性真核表达载体可以抑制卵巢癌细胞HO-8910PM中骨桥蛋白的表达。　　
2.骨桥蛋白可能与卵巢癌细胞株HO-8910PM的增殖相关。　　
3.骨桥蛋白干扰联合紫杉醇对卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖有一定的协同作用,骨桥蛋白可能成为卵巢癌的药物治疗中的联合靶点。