参麦注射液及其活性成分对缺血再灌注后心肌细胞的影响

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目的:1、明确参麦注射液改善心肌缺血再灌注损伤是否通过调节钙调蛋白Phospholamban(PLB)的表达和磷酸化水平来改善细胞内钙浓度的机理;2、探讨人参皂苷对缺血心脏的心功能的改善作用及可能的钙相关的机理;3、比较参麦注射液复方制剂是否优于人参皂苷单纯制剂。方法:利用新生大鼠原代心肌细胞建立缺氧/复氧(I/R)模型,实验分为正常培养组(N)、正常培养+参麦组(N+SM)、正常培养+人参总皂苷组(N+TSPG)、正常培养+人参皂苷Rgl组(N+Rgl)、缺氧/复氧组(I/R)、缺氧/复氧组+参麦组(I/R+SM)、缺氧/复氧组+人参总皂苷组(I/R+TSPG)、缺氧/复氧+人参皂苷Rgl组(I/R+Rg1),采用流式细胞仪测定凋亡细胞百分率、细胞内钙的平均荧光值,实时荧光定量聚合酶式反应(RT-PCR)法测定心肌细胞肌浆网钙泵(SERCA)和PLB的mRNA表达量,Western Blot法测定心肌细胞SERCA和PLB、磷酸化PLB (p-PLB)的蛋白表达量。结果:心肌细胞缺氧/复氧后,PLBmRNA及蛋白表达无显著变化,p-PLB蛋白表达和SERCA的mRNA及蛋白表达均有不同程度的下降,而I/R+Rgl组较I/R组上述变化无明显差异(P>0.05),I/R+SM组p-PLB蛋白表达、p-PLB/PLB、SERCA mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01),PLB/SERCA明显下降(P<0.01),I/R+TSPG组SERCA mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01),PLB/SERCA明显下降(P<0.05),p-PLB蛋白表达、p-PLB/PLB无明显差异(P>0.05)。I/R+SM组较I/R+TSPG组SERCA mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05)、PLB/SERCA明显降低(P<0.05)。I/R+SM组较I/R组凋亡细胞百分率均有不同程度下降(P<0.05),I/R+SM组较I/R组细胞内钙的平均荧光值均有不同程度的降低(P<0.01),I/R+TSPG组、I/R+Rgl组细胞凋亡率变化无明显差异(P>0.05),I/R+TSPG组细胞内钙离子浓度较I/R升高(P<0.05),I/R+Rgl无明显变化。结论:1、参麦注射液能通过调节钙调蛋白PLB的磷酸化水平来改善细胞内钙浓度的机理来改善心肌缺血再灌注损伤;2、人参总皂苷可抑制缺血再灌注后心肌细胞内钙离子浓度,进而改善心功能,此过程可能跟促进SERCA表达有关,但不通过钙调蛋白PLB磷酸化途径;3、参麦注射液复方制剂可能优于人参皂苷单纯制剂。
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