论文部分内容阅读
本试验以桃和樱桃为材料，通过同源性分析设计定向引物，从基因组 DNA中定向克隆ACC氧化酶、合成酶基因。对PCR扩增的目的片段DNA用 1％ 琼脂糖凝胶电泳检测后，进行回收、连接转化，通过蓝白筛选挑取白色菌落 提取质粒DNA进行酶切鉴定和质粒PCR鉴定，确定重组子后用双脱氧终止法 测定DNA全序列。试验筛选出适宜的ACC氧化酶和ACC合成酶基因克隆的 PCR反应体系、外源目的片段DNA连接反应体系和重组子酶切鉴定反应体 系。DNA测序结果显示，桃的 ACC氧化酶基因序列全长为 1313bP，樱桃的 ACC氧化酶基因序列全长为 1310bp，它们均由 2个外显子和 3个内含子构成， 外显子总长为 1000bp。同源性分析可知，桃与杏的 ACC氧化酶基因 mRNA序 列、编码的氨基酸序列同源性分别达到94.1％和96．7％，而樱桃与桃的ACC 氧化酶基因DNA序列同源性达97.8％。另外，桃的ACC合成酶基因序列全长 为 1416bp，与李子的 ACC合成酶基因 mRNA序列同源性达 71．2％。