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目的:通过实验揭示炮制对黄精中多糖、小分子糖等糖类成分的影响;在此基础上对黄精小分子糖部位的药理活性进行研究,为黄精中小分子糖的研究开发和临床应用提供科学依据;利用现代波谱及色谱技术对低聚糖的分离纯化和结构进行研究,为进一步研究黄精的药效物质基础以及低聚糖系列产品的开发提供方法参考;优选适合工业化生产的最佳提取纯化工艺,为开发利用黄精中小分子糖类和提高黄精的商品价值奠定基础。 方法:(1)采用苯酚-硫酸法分别对常压和高压蒸制黄精样品中的总糖、多糖和小分子糖进行含量测定,揭示炮制后黄精中多糖、小分子糖等糖类成分的变化规律;(2)采用腹腔注射环磷酰胺的方法建立免疫抑制模型,考察黄精中小分子糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率、溶血素和溶血空斑形成的影响;(3)采用D101大孔吸附树脂柱、活性炭柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析等一系列方法对黄精中低聚糖进行分离纯化,对于得到的低聚糖样品进行理化性质鉴别;苯酚-硫酸法测定其总糖含量;HPGPC测定纯度和分子量;薄层层析和乙酰化GC分析单糖组成;利用红外光谱、1HNMR和13CNMR对其结构进行进一步分析;(4)以黄精中小分子糖含量为指标,考察提取温度、时间、次数、料液比等因素对小分子糖提取率的影响,在单因素实验的基础上,利用正交试验法对黄精中小分子糖的提取工艺条件进行优化;通过比较AB-8、D101、XDA-6和LSA-20四种大孔吸附树脂对小分子糖的纯化性能,筛选出较合适的树脂并确定最佳的上样量、上样浓度、洗脱剂用量和洗脱流速。 结果:(1)常压和高压蒸制黄精样品中多糖含量均随蒸制时间的延长呈下降趋势,常压蒸制黄精样品中小分子糖含量50h前呈下降趋势,50h～70h含量变化趋势不明显。总体来看,小分子糖含量在蒸制时间20h前最高,且变化较为平缓;(2)黄精中小分子糖能够显著提高环磷酰胺致免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬指数和吞噬百分率,可显著促进溶血素和溶血空斑的形成;(3)分离纯化得到1个低聚糖样品HJG-1:灰白色疏松粉末,纯度较高,总糖含量为91.29％,分子量为1471,为单一葡萄糖组成的D—吡喃葡聚糖,分子结构中葡萄糖的连接方式主要为1→3和1→4,苷键构型以β—糖苷键为主,还含有少量的α—糖苷键;(4)黄精中小分子糖的最佳提取工艺为提取温度90℃,料液比1:30,提取时间2h;优选的树脂纯化方法即将约4倍柱床体积的浓度为36.32mg/ml的黄精小分子糖溶液通过AB-8大孔吸附树脂柱,进行动态吸附,用约8倍柱床体积的蒸馏水洗脱,流速1.0ml/min。 结论:揭示了炮制后黄精中多糖、小分子糖等糖类成分的变化规律;进一步阐明黄精中小分子糖具有较好的免疫活性;摸索出一套适合低聚糖分离纯化和结构分析的方法;优选适合工业化生产的最佳提取纯化工艺,使黄精中小分子糖得到有效地富集,为进一步研究黄精的药效物质基础,开发利用黄精中小分子糖类和提高黄精的商品价值奠定基础。