论文部分内容阅读
肺纤维化是一种严重危害人类健康的疾病,通常是由于严重的外部创伤,感染,自发免疫反应,药物不良副反应等因素,引起肺的永久性损伤,导致肺泡外基质反复破坏,过度修复重建并沉积,最终导致正常肺组织结构改变、功能丧失。肺纤维化发病过程是一个复杂的病理过程,每个过程有多种细胞及细胞因子参与其中,目前其发病机理尚未完全阐释清楚。以往人们对于肺纤维化治疗和发病机制研究大多主要集中于纤维化形成过程中起主要作用的成肌纤维细胞的增殖,凋亡和活化等方面,近年来大量的临床与实验研究证实在肺纤维化的形成过程中支气管肺泡灌洗液BALF中的炎症细胞、细胞因子、蛋白和酶异常增多,它们与肺组织细胞之间的相互作用在肺纤维化形成过程中具有重要作用,提示我们抑制早期炎症反应可能也是预防纤维化形成的一种有效手段。MLN4924是最近报道的一种选择性NEDD8活化酶(NAE)的小分子抑制剂,它是AMP类似物,主要通过与NAE形成NAE-MLN4924复合物抑制NAE活性,从而抑制了部分依赖于Cullin-Ring E3 ligase (CRL)酶的蛋白质泛素化降解途径(Neddylation),由此导致了此类蛋白质的积聚,CRL的底物蛋白包括DNA复制剪切蛋白CDT1,ORC1,细胞周期抑制因子如p21,p27,Wee1。此前,关于MLN4924的研究报道多集中于其通过阻滞癌细胞周期或者引起细胞凋亡而发挥其抗肿瘤特性(6),而关于其在炎症反应中的作用知之甚少,通过查阅文献我们发现CRL的底物包括NF-KB抑制因子IκB-α,提示我们MLN4924在炎症反应中应该有一定作用。本研究选取已经证明具有抗肿瘤活性的MLN4924,通过建立小鼠急性肺损伤,肺纤维化疾病模型,探究MLN4924对于肺纤维化的治疗作用及其具体机制。本论文主要通过以下几个部分进行论述：1.MLN4924可以有效抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病变在本研究中,我们对C57BL/6小鼠气管滴注博来霉素进行肺纤维化疾病模型造模。在滴注后第二天进行腹腔注射MLN4924干预治疗,第28天处死小鼠,收集肺组织,右肺行苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色,观察肺部形态改变,并进行病理评分,左肺经酸解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量。实验结果表明,与对照组相比,用MLN4924进行干预可以明显改善博来霉素引起的小鼠肺泡炎、肺纤维化症状。2.MLN4924抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化早期急性肺损伤在本研究中,我们利用气管滴注LPS建立小鼠急性肺损伤模型,滴注LPS后进行腹腔注射MN4924进行干预治疗,在不同时间点对实验小鼠小鼠放血处死,收集标本,进行肺部苏木精-伊红(HE)染色,检测肺部干湿比(W/D),同时行支气管肺泡灌洗,检测肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白含量,有核细胞细胞总数,中性粒细胞数目,巨噬细胞数目。各项生理指标和实验结果表明,MLN4924可以有效减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。3.MLN4924抑制小鼠急性肺损伤的分子机制众所周知,核转录因子NF-κB在炎症反应中发挥着极其重要的调控作用,而其抑制剂IκBα是CRL的底物,因此我们很容易想到MLN4924对于肺纤维化早期炎症的抑制作用与NF-κB通路有一定的关系,同时MAPK信号通路在免疫应答中也发挥着重要作用。在本节中,我们着重探究MLN4924在炎症阶段对于NF-κB和MAPK信号通路的影响。通过免疫印迹实验我们惊喜地发现,MLN4924处理后在免疫细胞和上皮细胞中均可以显著抑制IκB-α的降解,从而抑制了NF-κB信号通路的活性,同时在上皮细胞中MLN4924还可以抑制MAPK信号通路中p38的磷酸化,从而抑制了肺损伤过程中MAPK信号的通路的活化。综上所述,我们得出以下实验结论：1.MLN4924通过抑制肺损伤早期的炎症反应从而减缓后期的肺纤维化病变2.MLN4924通过影响NF-κB信号通路调控对于肺损伤引起的炎症反应