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目的:研究食管鳞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)患者肿瘤引流淋巴结(tumor draining lymph node,TDLN)和肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)内吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达水平及其与淋巴细胞亚群的关系,并在蛋白水平和基因水平检测TME和TDLN中IDO与桥接整合因子-1(bridging integrator-1,Bin1)表达水平之间的关系,通过分析IDO和Bin1与ESCC患者临床特征的关系探讨其临床意义。方法:1.收集66例ESCC患者的肿瘤组织、癌旁组织和TDLN,将每例标本分为3份,按下述方法处理:(1)迅速置于液氮中,然后置于-80℃超低温冰箱中贮存以备提取RNA;(2)以4%甲醛溶液固定以备制作蜡块,用于免疫组化染色;(3)无菌条件下研磨为单细胞悬液以备流式细胞术检测;。2.流式细胞术分析TDLN内淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD3-CD16+CD56+NK细胞、CD3-CD19+B细胞和CD4+CD25+Treg细胞)的比例。3.免疫组化方法检测肿瘤组织、癌旁组织及TDLN内IDO和Bin1的蛋白表达水平,分析TDLN中淋巴细胞亚群分布与IDO表达水平的关系,并在蛋白水平分析IDO与Bin1表达情况之间的关系。4.RT-PCR方法检测肿瘤组织、癌旁组织及TDLN内IDO和Bin1的表达水平,在基因水平分析IDO与Bin1表达情况之间的关系,并分析IDO和Bin1在基因和蛋白水平表达的一致性。5.分析ESCC肿瘤组织内IDO和Bin1蛋白表达水平与患者临床特征的关系。结果:1.66例TDLN中共23例为转移阳性,43例为转移阴性。与转移阴性淋巴结相比,转移阳性淋巴结内CD3+T细胞比例(45.57±10.17%vs.60.65±7.06%,P<0.001)、CD3+CD4+T细胞比例(30.37±7.20%vs.34.54±6.44%,P=0.019)、CD3+CD8+T细胞比例(15.07±3.99%vs.21.18±4.29%,P<0.001)和CD3-CD16+CD56+NK细胞比例(4.30±1.56%vs.5.78±1.14%,P<0.001)降低,而CD3-CD19+B细胞比例(34.58±12.47%vs.21.63±5.87%,P<0.001)和CD4+CD25+Treg细胞比例(4.42±1.31%vs.3.17±0.92%,P<0.001)升高。23例转移阳性淋巴结中20例(86.96%)高表达IDO,43例转移阴性淋巴结中25例(58.14%)高表达IDO。转移阳性淋巴结比转移阴性淋巴结能够表达更高水平的IDO(P=0.017)。2.66例TDLN中共45例(68.18%)高表达IDO。与低表达IDO的TDLN相比,高表达IDO的TDLN内CD3+T细胞比例(51.65±10.54%vs.63.43±6.71%,P<0.001)、CD3+CD4+T细胞比例(31.34±6.60%vs.36.83±6.29%,P=0.002)CD3+CD8+T细胞比例(18.03±5.02%vs.21.25±4.63%,P=0.029)和CD3-CD16+CD56+NK细胞比例(4.74±1.31%vs.6.40±1.15%,P<0.001)降低,而CD3-CD19+B细胞比例(29.33±10.84%vs.19.33±6.23%,P<0.001)和CD4+CD25+Treg细胞比例(4.08±0.99%vs.2.58±0.88%,P<0.001)升高。3.66例ESCC组织中共38例肿瘤组织高表达IDO蛋白,无癌旁组织高表达IDO蛋白,肿瘤组织与癌旁组织的IDO表达水平的差异具有统计学意义(P<0.001)。与低表达IDO的TME相比,高表达IDO的TME内CD3+T细胞比例(45.67±10.98%vs.57.69±11.40%,P<0.001)、CD3+CD4+T细胞比例(41.54±6.71%vs.48.35±6.34%,P=0.002)CD3+CD8+T细胞比例(18.26±4.05%vs.20.17±4.57%,P=0.019)和CD3-CD16+CD56+NK细胞比例(4.97±1.25%vs.5.87±1.09%,P<0.001)降低,而CD3-CD19+B细胞比例(24.43±7.13%vs.18.34±6.58%,P=0.027)和CD4+CD25+Treg细胞比例(5.08±1.09%vs.2.78±0.84%,P<0.001)升高。4.在TDLN内共37例低表达Bin1,在TME内共42例低表达Bin1。在TDLN和TME内IDO蛋白和Bin1蛋白的表达成负相关关系(P<0.001)。5.在TME和TDLN中,高表达IDO蛋白的TDLN较低表达IDO蛋白的TDLN IDO m RNA的表达水平显著提高(P<0.001),低表达Bin1蛋白的TDLN较高表达Bin1蛋白的TDLN Bin1 m RNA的表达水平显著降低(P=0.001)。该结果表明在ESCC患者TME和TDLN中IDO和Bin1表达在基因水平和蛋白水平上是一致的。6.ESCC患者肿瘤组织中IDO表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.001;P=0.018;P=0.004),但与患者性别、年龄和肿瘤侵犯深度无关(P=0.902;P=0.793;P=0.159);肿瘤组织中Bin1表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P=0.010;P=0.045;P=0.015),但与患者性别、年龄和肿瘤浸润深度无关(P=0.914;P=0.797;P=0.103)。结论:1.转移阳性TDLN比转移阴性TDLN表达更高水平的IDO,肿瘤组织比癌旁组织表达更高水平的IDO。TDLN和TME内淋巴细胞亚群紊乱与高水平表达的IDO密切相关,表明IDO有诱导TDLN内肿瘤免疫逃逸的作用。2.在蛋白水平和基因水平上,TME和TDLN中IDO与Bin1的表达水平之间均成负相关关系。IDO和Bin1在基因水平和蛋白水平上的表达情况一致,推测不存在转录后调控机制。3.ESCC患者肿瘤组织中表达的IDO和Bin1与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移密切相关,但与患者性别、年龄和肿瘤浸润深度无关。