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目的:骨髓增殖性肿瘤(MPN)是一组异质性恶性血液病,其特征是一类以一系或多系髓系细胞包括红系、粒系和巨核系增殖为主的克隆性造血干细胞疾病。经典的MPN即BCR/ABL阴性的MPN分为三种亚型,真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF)。MPN中常见的三种驱动因素为JAK2、MPL和CALR基因突变,一般情况下三种基因突变独立存在,相互排斥。研究显示MPN以散发病例为主,发病机制复杂,少数存在家族聚集的情况,家族性MPN为同一家系中出现2例及2例以上的MPN患者,表明其发病具有遗传易感性。因此现在越来越多的研究人员关注到家族性MPN这一群体,为深入探讨MPN发病机制提供依据。我们在临床工作中发现一家族性MPN,此家族中存在两例MPN患者,一例为携带JAK2V617F基因突变的PV患者,一例为携带JAK2V617F基因突变的ET患者。本研究旨在通过对该家族性MPN部分成员全外显子测序寻找与JAK2V617F突变有关的遗传易感基因,为阐明家族性MPN的发生机制提供理论依据。方法:1.家系调查:收集自2016年10月到2018年10月就诊于山西医科大学第二医院血液科的MPN患者,经询问家族史筛选出具有家族史的MPN患者,经患者及家属知情同意,从先证者入手,追溯与患者有血缘关系的所有家庭成员信息,对家族中各成员的患病情况进行详细调查并绘制系谱。2.样本采集:采集家系中2名MPN患者的毛囊组织(Hair follicle tissue,H)和外周静脉血(peripheral blood,PB)样本、患者家族中无临床表型且无JAK2V617F突变、MPL突变、CALR突变的2名健康成员外周静脉血样本。3.全外显子组测序分析:提取各样本基因组DNA,基于Illumina测序平台,采用Agilent SureSelectXT Human ALL Exon Kit进行捕获建库,应用Paired-End方法完成4例(6个)样本全外显子组测序分析,有效测序深度分别为PB(200×)、H(100×),平均Q≥80%。分析全外显子组原始数据找到2名患者中共存但健康成员中没有的种系突变。4.验证:将所有筛选出的种系突变在候选家族MPN患者和正常健康成员中进行一代测序进行验证,同时联合Polyphen 2和SIFT突变预测工具来评估关联性较大的种系突变。对我院收集的MPN标本库中初发存在JAK2V617F基因突变的MPN标本,检测候选种系突变基因的突变发生情况。结果:1.此家系共涉及两代成员共9人,其中男3人,女6人。两例MPN患者一例为携带JAK2V617F基因突变的PV患者,一例为携带JAK2V617F基因突变的ET患者。家族中其他正常健康成员7人,其中3人拒绝配合此项研究,4人签署了知情同意书。2.全外显子组测序分析最终得出5个易感种系突变,分别为3个可能的致病性错义变体ST6GALNAC4:c.C430T(p.R144X),PEX2:c.T227C(p.V76A)和MLLT10:c.1183G>A(p.Ala395Thr)以及2个剪接位点CHMP4B:c.610+9T>C,TBC1D23:c.1687+5A>G。3.分别对上述错义突变位点设计引物,通过一代测序的方法在患者和家族中正常健康成员种进行验证,结果只有ST6GALNAC4:c.C430T(p.R144X)在两位患者中同时检出,且在家族正常健康成员中未检出。4.基于我院血液科实验室MPN标本库中初发JAK2V617F基因突变的MPN标本,时间从2016年11月至2019年10月,共307例。通过一代测序对307例病例进行ST6GALNAC4 R144X筛选,检测结果均为阴性。结论:1.通过全外显子组测序分析筛选出ST6GALNAC4是家族性MPN易感种系突变。据我们所知,这是首次将ST6GALNAC4与恶性血液疾病联系起来的研究。2.ST6GALNAC4基因作为JAK2V617F阳性MPN的易感种系突变,需进一步扩大样本进行验证及功能研究。