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第1章大鼠视网膜色素上皮细胞系RPE-J分泌中性脂质功能的研究。
目的：检测大鼠视网膜色素上皮细胞系(RPE-J)是否表达载脂蛋白的基因及其是否具有合成和分泌中性脂质的功能。
方法：将RPE-J细胞培养于组织培养板及Transwell膜上，用RT-PCR检测载脂蛋白mRNA的表达。 Western Blotting和免疫沉淀检测蛋白质表达。将荧光标记颗粒加入细胞中培养以检测细胞吞噬功能。细胞中加入光感受器细胞外节，培养不同时间点后提取脂质，用溥层层析法和酶学荧光法分析细胞中脂质含量及变化。用放射性标记的Oleic Acid([<3>H]-oleate)和Palmicit Acid([<3>H]-Palmitic)检测细胞新合成和分泌中性脂质的功能。
结果： RPE-J细胞有载脂蛋白A-Ⅰ，A-Ⅱ，B，E，C-Ⅰ，C-Ⅱ，C-Ⅲ和J以及相关的基因包括微粒体甘油三酯酸转移蛋白(MTP)，固醇酯酰基0转移酶1(Soatl)，固醇酯酰基0转移酶2(soat2)，ATP结合位点家族蛋白1(ABCA1)，酪氨酸激酶受体(MertK)的mRNA表达；同时也检测到载脂蛋白A-Ⅰ，B，E和MTP的蛋白质表达。RPE-J细胞具有吞噬功能。吞噬光感受器细胞外节后，RPE-T细胞中甘油三酯含量增加5.7倍，磷脂含量增加2.6倍，非酯化胆固醇增加1.5倍，酯化胆固醇增加0.3倍。RPE-J细胞和培养基内可以检测到新合成的放射标记的中性脂质，细胞内新合成的脂质含量随时间延长而增加；分泌入培养基中的中性脂质只有磷脂随时间延长而增多。
结论：RPE-J细胞有多种载脂蛋白及微粒体甘油三酯转移蛋白的基因表达。吞噬光感受器细胞外节后，RPE-J细胞中脂质增加。RPE-J细胞的培养基中加入长链脂肪酸后，细胞可以新合成和分泌中性脂质。
第2章载脂蛋白、非酯化胆固醇和酯化胆固醇在分离的玻璃膜疣中的分布。
目的：检测载脂蛋白(apo)基因在人体视网膜色素上皮细胞和神经视网膜中的表达；检测载脂蛋白在黄斑区外玻璃膜疣的免疫原性及分布；检测胆固醇在玻璃膜疣的分布，为玻璃膜疣的生物合成及视觉影像新技术提供信息。
方法：用RT-PCR方法检测人体视网膜色素上皮细胞、视网膜及肝脏肿瘤来源的HepG2细胞中的载脂蛋白mRNA；从10个黄斑区正常的捐献者(58岁至93岁)的眼球中人工分离玻璃膜疣，眼球于捐献者死后6小时内取出并固定于4﹪多聚甲醛溶液。冰冻切片收集玻璃膜疣(每张切片6-57个玻璃膜疣)，用间接免疫荧光的方法检测载脂蛋白A-Ⅰ，A-Ⅱ，C-Ⅰ，C-Ⅲ，C-Ⅲ，E，和J。Filipin染色检测非酯化胆固醇和酯化胆固醇在玻璃膜疣中的分布。
结果：载脂蛋白C-Ⅰ，C-Ⅱ，E，和J的RT-PCR产物能在视网膜和视网膜色素上皮细胞中检测到。ApoA-Ⅱ仅在视网膜中发现。ApoC-Ⅲ未在视网膜及视网膜色素上皮细胞中检测到。所有载脂蛋白的抗原能在玻璃膜疣中检测到，按其免疫反应阳性百分比由高到低排列如下：ApoE(99.5﹪)， ApoJ(99.5﹪)， ApoC-Ⅰ(93.1﹪)，ApoB(80.4﹪)，ApoA-Ⅰ(61.0﹪)，ApoA-Ⅱ(59.2﹪)，ApoC-Ⅱ(57.7﹪)和ApoC-Ⅲ(16.6﹪)。免疫反应有的均匀分布于整个玻璃膜疣(56.7﹪)，有的局限分布于玻璃膜疣的外缘(16.0﹪)，有的以上两种情况均有(21.2﹪)。非酯化胆固醇和酯化胆固醇均能在玻璃膜疣中检测到。玻璃膜疣具有Filipin染色的核，此核富含非酯化胆固醇而缺乏酯化胆固醇；也具有富含酯化胆固醇的外壳而缺乏富含非酯化胆固醇的外壳。
结论：视网膜色素上皮细胞具有分泌较大载脂蛋白颗粒的潜在功能。富含中性脂质及载脂蛋白的外壳可能是玻璃膜疣在眼底镜和眼底血管造影所见大小不同的原因。