论文部分内容阅读
(Ⅰ)TG互作因子(TG interacting factor，TGIF)属于TALE-homeodomain大家族成员之一。人类TGIF家族包括四个基因，TGIF，TGIF2，TGIF2LX和TGIF2LY。已有研究发现，TGIF突变常会导致面部畸形；而TGIF2在一些卵巢肿瘤细胞系中表达量明显增加；TGIF2LX/2LY在成人睾丸中特异性地表达。这些研究结果大多局限于表型或表达模式上的描述，而对于人类TGIF家族的分子功能特别是在发育过程中作用的认识较少。我们以果蝇为模式系统，通过转基因手段进一步探讨了人类TGIF家族的功能。结果显示：①在果蝇组织里，如，脂肪、表皮、以及神经细胞中表达人类TGIF2或者TGIF2LX会导致细胞生长与分裂受到抑制，并且这种抑制能被果蝇的Myc，Cyclin E或者人的c-MycS蛋白部分挽救，却不能被insulin通路所逆转。这些体内研究说明人类TGIF2和TGIF2LX可能参与了发育过程中细胞生长的调控。②体外研究显示果蝇TGIF具有转录激活因子(activator)活性，我们借助果蝇精子发生系统为此提供了体内证据。
(Ⅱ)理解发育过程中组织细胞生长与增殖的调控机制对于理解个体大小、器官大小以及肿瘤发生是至关重要的。借助突变体克隆筛选，我们筛出了几个可能参与调控细胞生长与增殖的候选基因，cg6700便是其中之一。鉴于果蝇cg6700是一个功能完全未知的基因，我采取两种研究手段，即，基因敲降和基因敲除，揭示其在果蝇发育过程中的功能。结果显示： CG6700是果蝇存活必需的。抗体染色显示，在果蝇发育过程中CG6700广泛表达并且定位于核内。特异性地敲降或去除CG6700会减少细胞数目导致器官变小，而该表型不是细胞死亡引起的。进一步研究发现，CG6700突变影响细胞增殖、导致突变体克隆呈生长劣势。遗传互作显示，CG6700作用于细胞周期蛋白Cyclin E上游。