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目的: 1. 分析2014年1月~2016年8月温州医科大学附属第一医院临床分离的肺炎克雷伯菌的标本来源、科室分布以及耐药情况，为有效地控制肺炎克雷伯菌感染以及临床合理用药提供依据。 2. 通过基因敲除技术对肺炎克雷伯菌中 S-核糖基高半胱氨酸酶（S-ribosylhomocysteinase, LuxS）编码基因luxS进行敲除，探究luxS基因对肺炎克雷伯菌生长特性以及不同阶段生物膜形成能力的影响。 3. 分析luxS影响肺炎克雷伯菌生物膜形成的机制，为控制肺炎克雷伯菌生物膜相关性感染提供一定的理论依据。 方法: 1. 回顾性调查2014年1月~2016年8月温州医科大学附属第一医院临床分离的肺炎克雷伯菌的标本来源、科室分布；应用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪对临床常用抗菌药物进行药物敏感性检测；分析300株敏感菌株和300株耐药菌株的生物膜形成能力。 2. 采用“Gene gorging”方法对2株临床分离肺炎克雷伯菌FK563（耐药株）和FK1979（敏感株）野生型菌株的luxS基因进行敲除，并构建相应的回补菌株。 3. 测定肺炎克雷伯菌FK563和FK1979野生型、luxS基因敲除菌株以及回补菌株在LB介质中的生长曲线以及在0.3%的LB半固体培养基上的游动性。 4. 采用96孔板结晶紫染色法检测检测肺炎克雷伯菌FK563和FK1979野生型、luxS基因敲除菌株以及回补菌株在早期（6 h）和晚期（24 h）生物膜形成能力。 5. 通过生物发光试验检测肺炎克雷伯菌FK563和FK1979野生型、luxS基因敲除菌株以及回补菌株在不同生长阶段群体感应（Quorum Sensing，QS）自诱导分子-2（Autoinducer-2, AI-2）的产生情况。 6. 采用扫描电子显微镜（Scanning electron microscope, SEM）观察肺炎克雷伯菌FK563野生型、luxS基因敲除菌株以及回补菌株在生物膜形成早期（6 h）和稳定期（24 h）时生物膜的结构。 结果: 1. 1027株肺炎克雷伯菌主要来自于痰液，占39.7%（408/1027），其次为血液占18.1%（186/1027）和尿液占12.5%（128/1027），此外，脓液占9.1%（93/1027），引流液占5.7%（59/1027），创面占1.4%（45/1027），其他类型的标本如脑脊液、胸水等占13.5%（108/1027）。1027株肺炎克雷伯菌主要分离自ICU病房，占27.9%（287/1027），其次为神经外科、脑外科，占7.9%（81/1027），此外，创伤、烧伤科占3.9%（40/1027），呼吸内科占0.9%（9/1027），神经内科占3.0%（31/1027），其他的科室（如：内分泌、骨科等）共占56.4%（579/1027）。 2. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、环丙沙星、左氧氟沙星和哌拉西林/他唑巴坦耐药率呈现逐年升高的趋势，研究发现敏感菌株与耐药菌株之间生物膜形成能力无差异。 3. 生长能力测定显示肺炎克雷伯菌野生型、luxS基因敲除菌株以及回补菌株之间生长曲线无显著差异，游动性结果显示三者之间在0.3%的LB半固体培养基上游动的距离无显著差异。 4. 96孔板结晶紫染色法结果显示：当生物膜形成时间为6 h时，耐药肺炎克雷伯菌FK563 luxS基因敲除菌株的生物膜与野生型菌株相比明显降低（P<0.05），其相应的回补菌株可以部分恢复野生型菌株的水平，敏感肺炎克雷伯菌FK1979在6 h的生物膜形成能力结果与FK563结果相似。但当生物膜形成时间为24 h时，FK563和FK1979野生型菌株、luxS基因敲除菌株以及相应的回补菌株之间无差异。 5. AI-2信号产生实验显示肺炎克雷伯菌FK563、FK1979 luxS基因敲除菌株在LB介质中不能产生AI-2信号，但回补菌株可以恢复野生型菌株的水平。并且在LB介质中，肺炎克雷伯菌FK563、FK1979野生型菌株和回补菌株在2~4 h生长期内，随着细菌密度的增加，AI-2信号也逐渐增加并达到最大值，4 h之后AI-2信号逐渐下降。 6. SEM观察结果显示，当生物膜形成时间为6 h时，FK563野生型菌株与回补菌株的生物膜形成能力较强，遍布整个视野，而luxS基因敲除菌株生物膜形成能力较弱，散在分布，细菌呈小部分聚集；当生物膜形成时间为24 h时，FK563野生型菌株与回补菌株生物膜内的细菌密集排列，形态完整；luxS基因敲除菌株形成生物膜的量相对较少。6 h与24 h的生物膜形成能力相比，三者之间的差异更加的明显。 结论: 1. 本院临床分离的肺炎克雷伯菌标本来源主要是痰液，并主要分离自ICU病房；对各类临床常用药物耐药现象严重，并且对头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、环丙沙星、左氧氟沙星以及哌拉唑林/他唑巴坦的耐药率呈现逐渐增高的趋势。 2. 肺炎克雷伯菌敏感菌株与耐药菌株之间生物膜形成能力无差异。 3. 肺炎克雷伯菌野生型菌株、luxS基因敲除菌株以及相应的回补菌株之间生长能力无差异，游动性也无差异，说明luxS基因对肺炎克雷伯菌生长能力和游动性无影响；此外，luxS基因对肺炎克雷伯菌早期（6 h）生物膜的形成能力影响明显，而对稳定期（24 h）生物膜的形成能力影响不明显。 4. luxS基因对肺炎克雷伯菌II型群体感应信号AI-2的产生起到至关重要的作用；其对肺炎克雷伯菌早期生物膜形成能力的影响可能是通过影响早期AI-2信号的产生以及影响生物膜的结构导致的。