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银杏黄酮是我国新开发的一种植物类黄酮制剂,由于其具有优良的抗自由基、抗氧化、抗衰老、及保护心血管等方面的生物学功效,目前已受到国内外的广泛关注。本论文采用银杏叶为原料,对银杏叶中黄酮类化合物的提取、含量检测、抗氧化活性及构-效关系等作了一系列较全面的研究,旨在为银杏叶资源的开发提供一些理论和实践指导。主要研究内容和实验结果如下:
1.首次采用纤维素酶酶解预处理与环糊精增溶作用相结合的方法提取银杏叶总黄酮,经单因素优选实验和正交实验,确定了银杏叶总黄酮的最佳提取工艺:料液比1/60,酶浓度0.2mg.ml-1,酶解时间150min,酶解温度40℃,酶解pH=7.0,M-β-环糊精浓度2.0﹪,提取温度60℃,提取时间180min。银杏叶原料经酶解预处理后加入甲基化β-环糊精水溶液浸提,对叶得率可达2.68﹪。该工艺与微波辅助提取和传统的醇提法相比,提取率略有提高,操作简单易行,而且避免了有机溶剂的使用。这表明纤维素酶酶解及M-β-环糊精对黄酮类化合物的包合增溶作用在黄酮类化合物提取方面具有广泛的应用前景。
2.用schaal烘箱法测定了银杏叶提取物、天然番茄红素、天然VE、VC以及它们复合而成的“复合天然抗氧化剂”对猪油的抗氧化活性。
结果表明银杏叶提取物对猪油的抗氧化活性随浓度的增加而提高,添加量为0.06﹪的银杏叶提取物具有较强的抗氧化活性,抗氧化效果和添加量为0.02﹪BHA相当。
银杏叶提取物、天然番茄红素、天然VE、VC对猪油均有一定的抗氧化活性,它们对猪油的总体抗氧化能力为银杏提取物>天然VE>天然番茄红素>VC。银杏叶提取物与天然番茄红素、天然VE、VC复合而成的“复合天然抗氧化剂”均表现出较强的抗氧化活性,其中0.04﹪银杏提取物+0.02﹪VC;0.04﹪银杏叶提取物+0.01﹪VC+0.01﹪天然VE抗氧化效果最佳,表现出较好的协同增效作用,抗氧化效果优于0.02﹪BHA
3.银杏叶中主要黄酮类化合物结构-抗氧化活性的理论研究
采用组合的密度泛函方法(先用分子力场法MM2对分子结构进行初始几何优化,然后用半经验方法AM1进行的几何优化,得到一个较为稳定的分子结构,最后用考虑电子相关的密度泛函理论的B3LYP方法在6-31G基组上进行了较为精确全优化计算)对槲皮素、银杏素、儿茶素、山奈酚、杨梅酮、木樨草素、桑色素、紫杉叶素进行了较为精确全优化计算,得到分子的稳定结构和氧原子电荷密度、O-H电荷差、O-H键解离能的理论参数。
计算结果显示,黄酮类化合物的抗氧化、清除自由基活性主要取决于羟基相对位置和数目,具有色原酮结构的黄酮C2-C3位上不饱和的双键和3位羟基也会一定程度上增强其抗氧化活性。同时与金属离子的络合也是黄酮类化合物阻止自由基氧化的途径之一。对黄酮类化合物抗氧化构-效关系的研究为筛选高效抗氧化剂和天然黄酮的结构修饰提供理论依据。