【摘 要】
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缺血性脑血管病的发病率在全部脑血管病中占据了80%的比例,已超过心脏病和恶性肿瘤,在我国致死性疾病中居于首位。由于发病率、致残率、病死率高的特点,使得该病一直以来都是
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缺血性脑血管病的发病率在全部脑血管病中占据了80%的比例,已超过心脏病和恶性肿瘤,在我国致死性疾病中居于首位。由于发病率、致残率、病死率高的特点,使得该病一直以来都是临床的一大危险信号,备受研究关注。脑缺血损伤的发生发展,涉及到一系列极其复杂的病理生理过程,各因素之间相互作用导致了最终的损伤形成。到目前为止,研究发现的常见机制主要包括自由基损伤、兴奋性氨基酸过量、Ca2+胞内积聚、细胞凋亡、炎症反应等。二氢杨梅素(Dihydromyricetin, DMY)是我国广西和湖南省的壮族、瑶族民间习用草药藤茶的主要黄酮类成分,多项研究表明DMY均具有多种药理活性。本课题组前期研究表明DMY500mg·kg-1可以明显降低小鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤后神经功能缺损评分、脑梗死体积和脑含水量,对局灶性脑I/R损伤具有一定的保护作用,其保护机制与抗氧化有关。本课题拟在建立改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞／再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R)局灶性脑缺血模型的基础上,从抗炎抗凋亡方面进一步研究DMY对小鼠脑I/R损伤的保护机制,为开发DMY为新型抗脑缺血脑病药物提供可靠的理论基础和实验依据。第一部分：DMY对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的影响目的观察DMY对小鼠局灶性I/R损伤后脑组织炎症反应和5一脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)的影响。方法雄性昆明种小鼠随机分为3组,即假手术组、I/R模型组及DMY(500mg·kg-1)组。改良线栓法制备小鼠局灶性脑缺血(3h)再灌注(24h)损伤模型。术前连续灌胃给药10d,每天1次,并在缺血前1h及再灌注后12h各给药1次。再灌注24h后取脑,免疫组织化学检测5-LOX与小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白(ionized calcium binding adaptor molecule 1, Ibal)表达；实时荧光定量PCR法检测小鼠脑组织5-LOX mRNA表达；ELISA法检测缺血脑组织匀浆5-LOX代谢物白三烯B4(leukotrienes B4, LTB4)和半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes, CysLTs)以及炎症因肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-a, TNF-a)含量。结果与模型组比较,DMY 500mg·kg-1抑制小胶质细胞活化并降低TNF-a水平,同时降低缺血脑组织5一LOX蛋白和1nRNA的表达,并减少LTB4与CysLTs的产生(P<0.05或P<0.01)。结论DMY可减轻局灶性脑I/R损伤炎症反应,可能是通过抑制5-LOX而起作用。第二部分：DMY对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响目的观察小鼠局灶性I/R损伤后神经元凋亡及Bax、Bcl-2表达变化,研究DMY对脑I/R损伤小鼠的抗凋亡作用。方法采用改良线栓法阻塞小鼠大脑中动脉,建立I/R损伤模型,将小鼠随机分成3组：I/R模型组、假手术组、DMY组,处理方法同第一部分,缺血3h再灌注24h后取小鼠脑组织,行TUNEL染色检测凋亡阳性细胞计数;采用免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法检测Bax/Bcl-2蛋白、mRNA水平表达。结果再灌注24 h,DMY可以减少缺血后脑组织中TUNEL阳性细胞(P <0.01, DMY vs. I/R),下调凋亡相关蛋白Bax,上调Bcl-2表达。结论DMY可以减轻小鼠局灶性I/R损伤所致细胞凋亡,其抗凋亡机制与DMY上调Bcl-2表达、下调Bax表达有关。
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