昆虫病原线虫及其共生细菌相关基因的表达及初步功能测定

来源 :中国科学院华南植物园 中国科学院华南植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:superlhl2010
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
昆虫病原线虫斯氏属(Steinernema)与异小杆属(Heterorhabditis)线虫是国际上新型的生物杀虫剂。这类线虫分别与Xenorhabdus和Photorhabdus属的共生细菌共生,其感染期线虫的恢复发育以及共生细菌对昆虫寄主的毒性对于这类线虫的产业化培养和应用发挥十分重要的作用。   多种基因参与了感染期线虫的恢复发育过程。本论文对Xenorhabdus。nematophila共生细菌诱导的小卷蛾斯氏线虫S.carpocapsae A24两个差异表达基因(Sc-A24-466、Sc-A24-583)进行了原核表达,并对表达的Sc-A24-583蛋白进行了初步的功能测定。   小卷蛾斯氏线虫Steinernema. carpocapsae A24的发育相关基因Sc-A24-466与PE-PGRS蛋白家族有高达41%的相似性。以S.carpocapsae A24总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了Sc-A24-466基因,将目的基因与pET-15b表达载体进行体外连接,构建了重组表达载体pET-32(+)-Sc-A24-466;于重组菌的对数生长期前期加入诱导剂IPTG(1 mmol/L),37℃下诱导表达8 h~12 h后,获得分子量分别约为29 kDa和20.1 kDa的融合蛋白;融合蛋白以包涵体形式存在,利用His·Tag融合标签的免疫印迹检测发现了融合蛋白。这一基因的原核表达为其下一步的功能测定提供了基础。   小卷蛾斯氏线虫S.carpocapsae A24的发育相关基因Sc-A24-583基因与丝氨酸蛋白酶抑制剂具有49%的同源性。本研究利用夏颖伟硕士构建的BL21(DE3)pET-15b-Sc-A24-583重组表达菌株于25℃进行诱导表达8 h~12 h,并对所表达的Sc-A24-583重组蛋白进行功能测定。结果发现该蛋白并没有丝氨酸蛋白酶抑制剂的活性,并且对昆虫寄主大蜡螟也没有毒性作用。   初生型Photorhabdus.luminescens共生细菌产生两种分子量分别为11.6 kDa和11.3 kDa的胞内晶体蛋白CipA及CipB,约占细菌总蛋白的40%。本研究测定这类蛋白是否对非昆虫病原线虫具有毒性作用。   利用游娟(2005)构建的两种蛋白的BL21(DE3)pET-15b-cipA和BL21(DE3)pET-15b-cipB重组表达菌株,于37℃下进行诱导表达4~18h,并对表达的重组蛋白复性后对海洋线虫Panagrellus redivivus进行功能测定,结果发现复性后的CipA、CipB蛋白对海洋线虫P.redivivus没有毒性作用。说明P.luminescens菌株的cipA及cipB晶体蛋白除了对昆虫病原斯氏线虫具有营养作用外(You et al.,2006),对非昆虫病原线虫的P.redivivus不具毒性作用。   以上研究结果有助于进一步研究昆虫病原线虫的发育机理及其与共生细菌的晶体蛋白的功能,推动昆虫病原线虫的产业化发展。
其他文献
城市化进程是全球变化的重要方面。江阴市作为中国率先实行改革开放的地区之一,经济发展迅速,其城市化过程在中国具有一定的代表性。研究江阴市城市化进程对土地利用/土地覆盖
眼运动控制(Oculomotor control)是视觉过程的重要组成部分,包括眼球、瞳孔和晶状体等器官的运动控制。眼运动,在一定程度上,是中枢神经系统活动的外部表现,通过对眼运动控制的研
本研究从宏观生态学角度,基于遥感技术,结合气象数据、地面观测与统计资料及已有研究基础,确定区域生态资产评估的主要内容,主要包括生产有机物质价值、吸收CO2价值、释放O2价值
学位
目的:探讨茶多酚对成骨细胞氧化损伤的影响.方法:以过氧化氢作为活性氧自由基处理成骨细胞,利用生化、细胞及分子生物学技术,研究茶多酚对抗成骨细胞氧化损伤的效果.结果:低
小菜蛾(Plutella xylostella L)是为害十字花科蔬菜的世界性大害虫。由于化学农药的大量使用,导致其对多种常规杀虫剂产生严重的抗药性,单纯依靠化学防治已难以控制其危害。因
在众多的可再生清洁新能源当中,风能资源的可利用量十分可观,是非常不错的的新型能源,在未来的能源结构中,举足轻重,应用前景广阔。抽水蓄能电站具备运行方式多样,调节方式灵活,调峰、填谷,对负荷变化反应快速等优点。因而将风电与抽水蓄能电站互联,形成互联系统,能够非常有效地利用多余的风能资源,达到最大化利用风能资源的目的。论文对风电与抽水蓄能互联系统的协调控制运行做了以下研究:(1)简要阐述了风电与抽水蓄
高效课堂的建构是学科教学的追求,一切的改进与完善都永远在路上。数学教师必须不断提升教学素养和教学艺术,想尽办法让枯燥的数学妙趣起来,让抽象的数学形象起来,让深奥的数学浅
换流变压器是高压与特高压直流输电系统中的关键设备,其可靠性直接影响整个系统的安全运行。交流叠加极性反转电压为换流变压器阀侧主绝缘的实际工况电压,这种电压相比交流叠加直流电压和极性反转电压更为复杂。目前在交流叠加极性反转电压下油纸绝缘的击穿特性还未被研究,针对这一问题开展研究具有学术价值和工程意义。本文主要研制了一套交流叠加极性反转高压设备。在油纸绝缘RC模型的基础上进行电路分析和参数计算,设计了交
聚合物型锂离子电池由于其优良的电化学性能及小型化、薄型化等优点成为锂离子电池研究的热点,聚合物电解质作为聚合物型锂离子电池的核心部件,其性能的好坏对电池性能的优劣起到了决定性的作用。目前研究较多的是吸液率较高、保液性较好的多孔型聚合物电解质,而制备多孔薄膜较理想的方法是高压静电纺丝法,但由于高压静电纺丝法制备的薄膜力学性能较差,限制了其实际应用。EVOH-SO3Li作为聚合物电解质在锂离子迁移过程
[目的]:发展一种高通量测量人脑皮层等位基因特异mRNA表达不平衡的手段。  [方法]:建立剂量敏感基因数据库。抽取总mRNA并逆转录,PCR扩增包含SNP位点的片断,连接识别片断并用So