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[目的]
探讨未成熟新生大鼠HIBD模型中脑组织VEGF表达和新生血管形成的情况，探讨丹参对此模型VEGF表达和新生血管形成的影响。
[材料与方法]
1.实验动物及分组
64只体重7～10g新生3日龄(postnatalday3，P3)SD大鼠(早产组，P3)，64只体重12～20g新生7日龄SD大鼠(足月组，P7)，各组又随机分为丹参治疗组(24只)、HIBD对照组(24只)和假手术组(16只)，雌雄不限。
2.动物模型的建立及用药
P3新生大鼠经结扎左侧颈总动脉及吸入6％浓度的氧2h制作早产HIBD模型；P7新生大鼠经结扎左侧颈总动脉及吸入8％浓度的氧2h制作足月HIBD模型；假手术组仅游离左侧颈总动脉而不结扎不缺氧。
丹参组术前24h及HI后即刻腹腔注射丹参注射液(早产0.06ml，足月0.1ml)，HI后每2h再注射丹参(早产0.04ml，足月0.06ml)一次，连续3次。对照组大鼠在同时间注射等量生理盐水。
3.脑形态组织学检查
术后1d、3d、7d时各组分别处死4只大鼠，脑组织于10％中性甲醛固定。观察缺氧缺血前后动物行为改变及脑形态学改变。
4.免疫组织化学染色和量化
脑组织石蜡切片行免疫组织化学染色，以VEGF小鼠抗大鼠IgG单克隆抗体标记VEGF，采用全自动图像分析系统分析VEGF阳性单位表达的灰度值；以CD31兔抗大鼠IgG多克隆抗体标记微血管，高倍镜下计数热点区微血管数。
5.RT-PCR
丹参组和对照组于术后1d、3d、7d时各处死4只大鼠，取缺氧缺血侧脑组织提取RNA，RT-PCR检测VEGF，以GAPDH为内参，计算相对单位，并和正常值(假手术组)比较。
6.统计学分析
结果以均数±标准差(x±s)表示。各组数据采用析因分析，同一天组间均数比较采用单因素方差分析，p＜0.05为差别有统计学意义。
[结果]
1.新生大鼠HIBD模型的表现和病理改变
所有HIBD模型组大鼠均有躁动、发绀、嗜睡、易激惹等表现，复氧后足月组出现平衡异常及左旋现象，爬行时右后肢呈拖步，睁眼后左眼眼裂比右眼眼裂小；早产组也有平衡异常，但其他表现少见。形态学检查见左大脑皮质神经元细胞水肿、变性、坏死、核固缩，胶质细胞增生；早产组还可见白质水肿，结构疏松；丹参治疗组水肿变性等改变均较对照组轻。
2.脑组织VEGF免疫组化染色结果
正常新生大鼠和HIBD模型组大鼠在神经元、内皮细胞、软脑膜细胞、胶质细胞等均可见VEGF表达。各处理组之间总的VEGF表达有统计学差异(F=21.170，p=0.000)，治疗组表达＞对照组＞假手术组；早产或足月组各处理之间总的VEGF表达有统计学差异(F=4.871，p=0.009)，治疗组表达＞对照组＞假手术组。P3对照组皮质VEGF表达HI后第1d、3d和假手术组差别有统计学意义(17.40±3.64vs.13.13±1.33，p＜0.01：13.81±1.38vs.10.51±1.53，p＜0.05)，治疗组HI后第3d、7d和对照组差别有统计学意义(23.77±1.46vs.13.81±1.38，22.12±1.01vs.14.30±3.10，p＜0.01)。P7对照组皮质VEGF表达HI后第1d、3d和假手术组差别有统计学意义(17.39±2.56vs.11.27±1.01，p＜0.01；16.00±1.61vs.11.42±1.99，p＜0.01)，治疗组均值大于对照组，但差别无统计学意义。白质各组间差别无统计学意义。
3.脑组织新生血管的形成
P3、P7假手术组皮质见少量新生血管，模型组见新生血管增多。早产和足月组之间总的新生血管数的差异有统计学意义(F=5.884，p=0.017)，早产组新生血管数＞足月组；各处理组之间总的新生血管数的差异有统计学意义(F=68.820，p=0.000)，治疗组新生血管数＞对照组＞假手术组；不同时间之间点总的新生血管数有统计学差异(F=38.965，p=0.000)，7d＞3d＞1d。P3对照组皮质新生血管数HI后第1d、3d和假手术组差别有统计学意义(2.55±0.16vs.1.55±0.31，p＜0.05：5.33±0.85vs.2.67±0.27，p＜0.01)，治疗组HI后第1d、3d、7d新生血管数均比假手术组多，差别有统计学意义(4.55±0.87vs.1.55±0.31，5.67±0.98vs.2.67±0.27，7.00±0.78vs.4.56±0.57，p＜0.01)，且第1d、7d和对照组相比差别有统计学意义(4.55±0.87vs.2.55±0.16，7.00±0.78vs.5.00±0.72，p＜0.01)。P7对照组皮质新生血管数HI后第3d、7d和假手术组差别有统计学意义(4.25±0.99vs.1.78±0.57，5.50±0.43vs.2.83±0.58，p＜0.01)，治疗组1d、3d、7d新生血管数均比假手术组多，差别有统计学意义(4.89±0.96vs.1.11±0.16，4.86±0.25vs.1.78±0.57，6.25±0.32vs.2.83±0.58，p＜0.01)，且第1d和对照组相比差别有统计学意义(4.89±0.96vs.1.89±0.57，p＜0.01)。P3对照组白质新生血管数HI后第7d和假手术组相比差别有统计学意义(1.33±0.27vs.0.89±0.35，p＜0.05)，治疗组HI后第3d、7d和假手术组差别有统计学意义(1.22±0.17vs.0.56±0.16，1.44±0.42vs.0.89±0.35，p＜0.01)。白质P7各组间差别无统计学意义。
4.脑组织VEGFmRNA的表达
假手术组有少量VEGFmRNA表达。早产和足月组之间总的VEGFmRNA的表达有统计学差异(F=7.433，p=0.009)，早产组高于足月组；各处理组之间总的VEGFmRNA的表达有统计学差异(F=20.928，p=0.000)，治疗组＞对照组＞假手术组；各时间点之间总的VEGFmRNA的表达有统计学差异(F=7.796，p=0.001)，3d＞1d＞7d。P3对照组第3dVEGFmRNA表达和假手术组相比差别有统计学意义(0.76±0.17vs.0.37±0.18，p＜0.01)，治疗组第1d、3d和假手术组比有统计学差异(0.89±0.23，1.14±0.18vs.0.37±0.18，p＜0.01)，且和对照组相比差别有统计学意义(0.89±0.23vs.0.60±0.17，p＜0.05；1.14±0.18vs.0.76±0.17，p＜0.01)。P7对照组和治疗组各时间点VEGFmRNA表达都较假手术组多，有统计学差异；治疗组第1d、3d和对照组相比差别有统计学意义(0.81±0.09vs.0.51±0.11，0.88±0.25vs.0.56±0.13，p＜0.05)。
[结论]
1.对新生3天大鼠作单侧颈总动脉(CCA)结扎加低氧(6％O2+94％N2)2h的处理能制备非致死性的早产大鼠HIBD模型；
2.早产和足月新生大鼠HIBD模型中均有VEGF蛋白、VEGFmRNA表达的上调和新生血管形成的增多，且VEGFmRNA表达上调和新生血管增多在早产新生大鼠更明显，VEGF可能介导此模型中的新生血管形成；
3.丹参可能上调早产和足月新生大鼠HIBD模型中的VEGF蛋白和VEGFmRNA的表达，并促进该模型中新生血管形成的增加，而且这种效果在用药早期和早产大鼠中更为明显。