【摘 要】
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目的本研究探讨人生长激素(human growth hormone,hGH)基因在小鼠体内的表达和持续时间以及表达的生长激素对小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α浓度的影响。方法1.构建真核细胞
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目的本研究探讨人生长激素(human growth hormone,hGH)基因在小鼠体内的表达和持续时间以及表达的生长激素对小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α浓度的影响。方法1.构建真核细胞高表达hGH基因的重组质粒pcDNA3-hGH,并对所构建的重组质粒进行内切酶图谱鉴定和序列分析。2.通过脂质体介导将含hGH的重组质粒pcDNA3-hGH转染入COS-1细胞中,通过免疫组化和ELISA的方法对COS-1细胞和培养上清中的hGH进行了观察,并用Jurkat细胞增殖法检测重组质粒表达蛋白的生物学活性。3.将重组质粒pcDNA3-hGH直接注射于小鼠股四头肌中,于注射后第5、15、25、40、60天从眼眶取血,分离血清,用ELISA方法检测血清中GH、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平; 同时取注射处的骨骼肌组织进行免疫组化染色以鉴定hGH的表达。结果1.所构建的重组质粒pcDNA3-hGH酶切结果与克隆质粒相同,DNA序列分析结果与文献报道完全一致。2.免疫细胞化学染色可见分泌hGH的阳性细胞,培养上清中hGH的含量达440ng/ml,并且该培养上清能促进Jurkat细胞的增殖。3.小鼠骨骼肌注射部位免疫组化结果在第60天仍可见hGH的表达,血清中hGH的水平明显升高,
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