【摘 要】
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本试验旨在研究水貂生长激素的克隆与表达，探索出批量生产的途径和方法。试验通过构建真核表达质粒pPIC9K-mGH，转化到巴斯德毕赤酵母GS115，利用含不同浓度G418(0.25、0.50、1.00
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本试验旨在研究水貂生长激素的克隆与表达，探索出批量生产的途径和方法。试验通过构建真核表达质粒pPIC9K-mGH，转化到巴斯德毕赤酵母GS115，利用含不同浓度G418(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/ml)的YPD平板进一步筛选多拷贝重组子。将多拷贝重组子用BMGY富集菌株，并用BMMY诱导表达蛋白，每隔24h取样一次并添加甲醇，使其终浓度为1％。将取得的菌样，离心取上清，TCA浓缩并进行SDS-PAGE和Western blot检测;通过构建真核表达质粒pVAX1-mGH，利用Lipofectamine TM 2000转染到BHK-21细胞中，用最小致死量为300μg/ml的G418进行阳性细胞株的筛选，进行免疫细胞化学和ELISA检测蛋白表达情况。本试验还将阳性重组质粒pVAX1-mGH注射到小鼠后肢的股四头肌，分别于注射后5、10、20、40、60d眼球采血，ELISA检测血清中mGH的含量，同时取注射部位的肌肉组织进行免疫组织化学检测。试验结果如下:
1.重组质粒pPIC9K-mGH转化到巴斯德毕赤酵母GS115中，经含4.00 mg/mlG418的YPD平板筛选出高拷贝细胞株，用SDS-PAGE检测mGH的表达。结果显示，用1％甲醇连续诱导3d后，目的蛋白的表达最多;Western blot鉴定表明目的蛋白在酵母中获得了表达。
2.重组质粒pVAX1-mGH转染到哺乳动物BHK-21细胞中，经G418筛选出阳性细胞株，免疫组化检测到目的蛋白在BHK-21细胞中获得了表达;ELISA检测到目的蛋白具有较好的免疫原性，且转染后48h，目的蛋白的表达量最多。
3.重组质粒pVAX1-mGH注射到小鼠后肢的股四头肌后40d，血清中目的蛋白的含量最多，且ELISA检测到目的蛋白具有较好的免疫原性。免疫组织化学检测到了特异性的目的蛋白，说明mGH在小鼠的肌纤维中得到了表达。
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