【摘 要】
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Rab/Ypt家族蛋白是迄今为止所发现的最为重要的转运蛋白,在真核生物泡囊形成和融合中均起着重要的作用,Vps9是一类液泡分选相关蛋白,与囊泡介导的液泡蛋白运输有关,酵母中Vps
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Rab/Ypt家族蛋白是迄今为止所发现的最为重要的转运蛋白,在真核生物泡囊形成和融合中均起着重要的作用,Vps9是一类液泡分选相关蛋白,与囊泡介导的液泡蛋白运输有关,酵母中Vps9是Ypt5的鸟苷酸交换因子(GEF),它能与Ypt5负显性状态(GDP结合态)结合释放GDP,促使Ypt5与GTP结合,从而使Ypt5处于活性状态下发挥生物学功能。稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)能够引起水稻稻瘟病,是研究植物与病原真菌互作的模式生物。研究表明,稻瘟病菌的Ypt5同源蛋白MoYpt51/52与稻瘟病菌生长发育和致病性相关。本研究通过同源比对,在稻瘟病菌数据库中找到三个假定含有VPS9结构域的蛋白,命名为MoVps9a、MoVps9b和MoVps9c,对三个蛋白进行了结构域分析,并利用基因敲除和酵母双杂系统研究Vps9基因的功能和Vps9a与MoYpt5的互作关系。结果表明除了含有VPS9特征结构域外,MoVps9a还含有CUE结构域,MoVps9a敲除突变体生长缓慢,产孢量下降至原来的1/32,致病性减弱[71]。透射电镜观察发现,与野生型菌株Ku80相比,MoVps9a敲除突变体菌丝内部没有大的液泡,呈现出许多小液泡,说明MoVps9a与MoYpt51/52类似,可能参与了细胞中同型囊泡的融合。我们还得到了 MoVps9a CUE结构域缺失突变体Mo Ypt9aΔCUE,表型分析发现该突变体与野生型相比无太大的差异,但产孢量下降了 1/16,说明在MoVps9a中,CUE结构域对分生孢子的产生有一定贡献。酵母双杂分析表明,MoVps9a分别与处于负显性失活状态MoYpt51和MoYpt52互作而不与正显性激活状态MoYpt51和MoYpt52结合,说明MoVps9a有可能成为稻瘟病菌中MoYpt51/52的GEF,但还需要进一步的验证。此外,我们对MoVps9b和MoVps9c进行了敲除,结果显示,与野生型相比,这两个基因突变体产孢量略有下降。
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