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目的：运用分子生物学等方法与技术,研究脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠大脑损伤侧皮层组织TLR4/NF-κB信号转导通路中相关信号分子表达变化以及眼针对其干预影响,旨在眼针治疗CIRI的作用机制提供实验依据。材料与方法：健康雄陛SPF级Wistar雄性大鼠以随机数字法分为正常组、假手术组、模型组、眼针治疗组和体针对照组。除正常组、假手术组外,其余大鼠采用改良的线栓法建立MCAO模型。神经缺损评分为1分-3分者视为造模成功。剔除造模不成功以及死亡鼠,将造模成功的大鼠再随机分为模型组、眼针治疗组和体针组。模型组常规喂养。眼针治疗组和体针对照组在缺血再灌注即刻及再灌注12 h后针刺,即每只动物分别针刺两次。MCAO术后24 h对各组大鼠进行神经功能缺损评分；采用干湿重法测定各组大鼠脑水肿情况；HE染色观察缺血侧大脑皮层组织病理学变化；Elisa法测定血清TNF a、IL-1β水平; RT-PCR方法测定各组大鼠缺血侧大脑皮层组织TLR4、MyD88及IKKβmRNA的表达；免疫组织化学及免疫印迹法测定测定各组大鼠缺血侧大脑皮层组织TLR4、MyD88、IKKβ及NF-κB (p65)的蛋白表达。结果：1.眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织形态学影响正常组及假手术组大鼠无神经功能缺损症状出现,平均均为0分。同正常组及假手术组相比,模型组大鼠均出现明显的神经功能缺损体征(p<0.01)；眼针组及体针组同模型组相比,神经功能缺损体征明显改善(p<0.05)；假手术组同正常组比较,脑组织含水量相当,无显著性差异(p>0.05)。同正常组及假手术组相比,模型组大鼠脑组织含水量显著升高(p<0.01)；眼针组及体针组同模型组相比,脑组织含水量明显降低(p<0.05)；通过HE染色可见,正常组及假手术组大鼠右侧大脑皮层组织神经细胞结构完整,神经细胞层次清晰,无水肿,神经元胞质丰富,核膜清楚；模型组大鼠右侧大脑皮层组织表现典型脑梗死改变：筛网状坏死灶,坏死灶边缘不清,梗死核心区神经元层次紊乱,核固缩、核碎裂、核溶解甚至消失,胞质疏松、水肿、染色变浅,细胞间质水肿,可以见到炎性细胞浸润及扩张的毛细血管。眼针组和体针组右侧大脑皮层组织筛网状坏死灶减小,边缘较清楚,也可见到炎性细胞浸润及扩张的毛细血管,各项病理改变均有不同程度的改善；且眼针组较体针组脑组织含水量略少,但无统计学差异(p>0.05)。假手术组同正常组相比较血清中TNFα、IL-1β含量没有明显差异(p>0.05)。模型组血清中TNFα含量显著升高(p<0.01)；眼针组和体针组血清中TNFα含量明显下降(p<0.01),二者没有差异；2.眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠缺血侧大脑皮层组织TLR4、MyD88表达的影响通过对RT-PCR产物电泳结果的观察以及凝胶扫描系统进行吸光度积分分析,正常组及假手术组TLR4、MyD88的mRNA均表达较少,二者之间没有显著差异(P>0.05)；同正常组与假手术组相比较,模型组TLR4、MyD88呈现明显高表达(P<0.01)；而眼针组和体针组表达较模型组明显下降(P<0.05),眼针组TLR4表达较体针组下降的略明显,但是没有统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色结果可见,正常组及假手术组大鼠脑皮层内未见TLR4、MyD88阳性细胞表达。模型组可见较多的TLR4、MyD88阳性细胞,胞浆着色,与正常组和假手术组比较有显著性差异(P<0.01)；眼针组和体针组阳性细胞数量显著减少,同模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05),眼针组和体针组之间没有明显差异(P>0.05)。通过对免疫印迹的结果进行吸光度积分分析,正常组及假手术组TLR4、MyD88蛋白均表达较少,二者之间没有显著差异(P>0.05)；同正常组与假手术组相比较,模型组TLR4、MyD88呈现明显高表达(P<0.01)；而眼针组和体针组表达较模型组明显下降(P<0.01),二者之间没有明显差异(P>0.05)。3.眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠缺血侧大脑皮层组织IKKβ、NF-κβ(p65)表达的影响通过对RT-PCR产物电泳结果的观察以及凝胶扫描系统进行吸光度积分分析,正常组及假手术组IKKβ的mRNA均表达较少,二者之间没有显著差异(P>0.05)；同正常组与假手术组相比较,CIRI模型组IKKβ呈现明显高表达(P<0.01)；而眼针组和体针组表达较模型组明显下降(P<0.01),二者之间没有明显差异(P>0.05)。免疫组化结果可见,正常组及假手术组大鼠脑皮层内可见少量的IKKβ阳性细胞表达,未见NF-κB(p65)阳性细胞表达。CIRI模型组可见较多的IKKβ、NF-κB(p65)阳性细胞,其中IKKβ阳性细胞胞浆着色,NF-κB (p65)阳性细胞胞核着色,与正常组和假手术组比较有显著性差异(P<0.01)；眼针组和体针组阳性细胞数量显著减少,同模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),二者之间没有明显差异(P>0.05)。通过对免疫印迹的结果进行吸光度积分分析,正常组及假手术组IKKβ、NF-κB (p65)蛋白均表达较少,二者之间没有显著差异(P>0.05)；同正常组与假手术组相比较,CIRI模型组IKKβ、NF-κB (p65)呈现明显高表达(P<0.01)；而眼针组和体针组表达较模型组明显下降(P<0.05),二者之间没有明显差异(P>0.05)。结论：1.模型组大鼠具有明显的神经功能缺损症状,脑水肿明显,眼针及体针能够显著改善神经功能缺损及脑水肿症状,二者没有显著差异；2.模型组大鼠右侧大脑皮层组织具有明显的病理学改变,可见大量炎性细胞浸润,眼针组及体针组各项病理改变均有不同程度的改善,且从形态学上看眼针改善的更为明显,但是没有统计学意义,说明眼针可以有效预防神经元损伤；3.模型组大鼠血清TNFα、IL-1β含量明显升高；眼针及体针能明显降低血清TNFα、IL-1β水平,降低炎症反应,具有保护脑组织的作用,二者差异不明显。4.模型组大鼠缺血侧大脑皮层组织TLR4、MyD88、IKKβ的mRNA表达、蛋白表达均增高；眼针治疗后能够显著降低缺血侧大脑皮层组织TLR4、MyD88、IKKβ的mRNA和蛋白表达,与体针组作用相当。5.模型组大鼠缺血侧大脑皮层组织NF-κB蛋白表达增高,活性增强；眼针与体针治疗后能够显著降低缺血侧大脑皮层组织NF-κB的表达,抑制NF-κB的活化,二者没有显著性差异。6.模型组大鼠缺血侧大脑皮层组织MyD88依赖的TLR4/NF-κB信号转导通路被激活,眼针治疗能够有效抑制这条信号转导通路,降低炎症反应,达到脑保护的目的。