【摘 要】
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本课题分别采用木瓜蛋白酶,中性蛋白酶,胰蛋白酶和碱性蛋白酶水解海参卵和牡蛎制备生物活性肽;采用DPPH体系、Fenton体系和还原力体系研究了肽的抗氧化活性;采用单因素实验和
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本课题分别采用木瓜蛋白酶,中性蛋白酶,胰蛋白酶和碱性蛋白酶水解海参卵和牡蛎制备生物活性肽;采用DPPH体系、Fenton体系和还原力体系研究了肽的抗氧化活性;采用单因素实验和响应面实验优化了肽的制备工艺。为考察分子量与活性的关系,将酶解肽用四种分子量切割范围不同(10,5,3和1 kDa)的超滤膜超滤,每种酶的酶解产物都得到五种分子量分布范围不同的肽组分:<10 kDa,5-10 kDa,3-5 kDa,1-3 kDa和<1 kDa,通过检测这些肽组分的抗氧化能力,发现肽的抗氧化能力与其分子量有关,<3 kDa的肽具有较强的抗氧化活性。为考察肽的氨基酸组成与活性的关系,将1-3 kDa的肽组分通过半制备高效液相色谱进行分离(色谱柱为阴离子交换柱),通过考察各分离组分对DPPH自由基的清除能力,发现保留时间短的碱性肽具有较强的清除自由基能力。根据肽的活性、水解度和肽得率综合选择最适酶。通过单因素实验和响应面实验,以酶解产物的水解度为指标,确定最适酶的最佳酶解工艺条件。实验结果表明:①木瓜蛋白酶为制备海参卵肽的最适酶,其最佳水解工艺条件为:温度52.06 ℃、pH值5.5、底物浓度8.41%、加酶量2500 U/g、反应时间4h。在此条件下,理论水解度为20.27%;实际水解度为20.51%。②中性蛋白酶为制备牡蛎肽的最适酶,其最佳水解工艺条件为:温度48.96℃、pH值7.08、底物浓度7.92%、加酶量2500 U/g、反应时间4 h。在此条件下,理论水解度为39.29%;实际水解度为39.53%。
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