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胰岛素(insulin)具有促进脂肪、糖原、蛋白质合成,降低血糖的作用,是目前用于治疗糖尿病的主要药品之一。目前利用大肠杆菌表达生产胰岛素的过程中,表达产物常会以包涵体的形式出现,要得到活性胰岛素涉及到表达胰岛素原蛋白的变性和复性,这会大大降低胰岛素的最终产量。本文旨在探索通过不同融合蛋白实现重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达。主要研究内容和结果如下:设计并合成胰岛素原基因,通过双酶切位点连接到pGEX-4T-2、pHis-Trx、pHis-NusA表达载体上,测序分析表明成功构建表达载体pHis-NusA-insulin、pHis-Trx-insulin、pGEX-4T-2-insulin。将大肠杆菌表达载体转化至大肠杆菌BL21中,SDS-PAGE蛋白电泳检测重组蛋白His-NusA-insulin、His-Trx-insulin可溶性表达。确定重组蛋白His-NusA-insulin的最适表达条件为37℃诱导5 h,IPTG的终浓度为0.1 mM,重组蛋白His-Trx-insulin的最适表达条件为25℃诱导5 h,IPTG的终浓度为0.1 mM。通过亲和层析(Ni-beads)分离纯化重组蛋白 His-NusA-insulin、His-Trx-insulin。His-NusA-insulin分离条件为150 mM咪唑洗脱杂蛋白,500 mM咪唑洗脱His-NusA-insulin,4℃透析过夜收集得到His-NusA-insulin,通过BradFord法测定透析收集得到蛋白浓度为1.059 His-Trx-insulin分离条件为100 mM咪唑洗脱杂蛋白,500 mM咪唑洗脱His-Trx-insulin,4℃透析过夜收集得到His-Trx-insulin,通过BradFord法测定透析收集得到蛋白浓度为0.491 μg/μL。利用不同浓度的TEV蛋白酶酶切重组蛋白His-NusA-insulin,检测到胰岛素原。本实验是以重组人胰岛素原为研究对象,探索研究通过共表达融合蛋白来增加重组胰岛素原的可溶性表达,为降低重组胰岛素的制备成本奠定基础。