论文部分内容阅读
分子组织工程学是将分子生物学与组织工程学有机结合，运用分子生物学的理论和技术，从分子水平研究细胞、组织诱导因子、生物材料及其相互作用的关系，为研制能更有效地恢复、维持或改善病损组织或器官功能的生物替代物奠定基础。 本研究以骨髓基质干细胞（BMSCs）作为靶细胞，TGFβ1基因片段作为目的基因，经LipofectAMINE转染目的基因与靶细胞中，观察BMSCs经基因转染后的生物学特性。探讨BMSCs作为基因治疗的靶细胞的可能性及BMSCs自身分泌的TGFβ1对其生物学特性的影响。 实验方法：载体pcDNA3-TGFβ1构建后，取新西兰兔骨髓，分离培养BMSCs，通过脂质体LipofectAMINEA介导pcDNA3-TGFβ1基因和空载pcDNA3转染BMSCs。采用电泳检测pcDNA3-TGFβ1构建是否成功；通过TGFβ1免疫组化染色检测转染是否成功；运用形态学观察、透射电镜（TEM）、流式细胞仪（FCM）、碱性磷酸酶（ALP）染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色等方法，观察转染后BMSCs增殖与分化情况。 实验结果：载体pcDNA3-TGFβ1构建成功；TGFβ1基因转染BMSCs成功，转染后BMSCs表达TGFβ1至少能够持续4周；转染后的BMSCs增殖活性增强，经G418稳定筛选后逐渐向软骨方向分化。对照组BMSCs转染后增殖活性较实验组低，没有向软骨细胞分化的趋势，经G418筛选后1周左右全部死亡。 第四军医大学硕士论文 结论：骨髓来源的基质干细胞可以作为基因治疗的受体细胞；脂质体 载体转染骨髓基质干细胞能够成功，可以应用于今后的临床或实验研究工 作中；TGFA基因转染 BMSCS能够促进其增殖和分化活性；TGF P，基因转染 BMSCS能够诱导其向软骨方向分化；骨髓基质干细胞能够成为分于组织工程 化软骨的理想种子细胞。