【摘 要】
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目的:检测促红细胞生成素肝细胞受体A2(EphA2)蛋白在肝细胞肝癌中的表达及其参与调控肝癌细胞侵袭的可能机制。方法:培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株MHCC97H、Hep3B,采用siRNA干扰法抑制肝癌细胞中EphA2、生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的表达,设立未处理组(未处理肝癌细胞),对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA2或Grb2),Wes
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目的:检测促红细胞生成素肝细胞受体A2(EphA2)蛋白在肝细胞肝癌中的表达及其参与调控肝癌细胞侵袭的可能机制。方法:培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株MHCC97H、Hep3B,采用siRNA干扰法抑制肝癌细胞中EphA2、生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的表达,设立未处理组(未处理肝癌细胞),对照组(加入对照siRNA)和siRNA干扰组(加入siRNA干扰EphA2或Grb2),Western blot法检测不同处理前后细胞中EphA2、Grb2蛋白的表达情况,Transwell小室检测细胞侵袭性。结果:体外侵袭实验结果显示MHCC97H、Hep3B、HL-7702穿透细胞的数量分别为:(401±3)/10HPF、(111±4)/10HPF、(31±3)/10HPF,人正常肝细胞与人肝癌细胞相比具有统计学意义(P<0.05),EphA2、Grb2蛋白在人正常肝细胞与人肝癌细胞中的相对表达量相比,差异均有统计学意义(P<0.05);siRNA抑制EphA2表达后,Hep3B和MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组穿透的细胞数量分别为:(111±4)/10HPF、(108±5)/10HPF、(53±3)/10HPF和(405±5)/10HPF、(399±4)/10HPF、(155±7)/10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=16.5,54.6,P<0.001),EphA2蛋白在Hep3B、MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组中的相对表达量siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA抑制Grb2表达后,Hep3B和MHCC97H细胞系未处理组、对照组、siRNA干扰组穿透的细胞数量分别为:(109±3)/10HPF、(107±4)/10HPF、(56±4)/10HPF和(403±4)/10HPF、(402±4)/10HPF、(163±5)/10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(t=16.9,67.2,P<0.001),Grb2蛋白在Hep3B和MHCC97H细胞未处理组、对照组、siRNA干扰组组中的相对表达量siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA抑制EphA2表达后,Grb2蛋白在Hep3B、MHCC97H细胞未处理组、对照组、siRNA干扰组中的相对表达量siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EphA2可能通过调控Grb2蛋白的表达进而来参与调控肝癌细胞的侵袭,据此,EphA2可作为治疗肝细胞肝癌的新靶点。
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