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目的:观察灵猫方对乙肝病毒(Hepatitis B virus)复制和乙肝表面抗原(HBsAg、HBeAg)分泌的抑制作用，探讨灵猫方抗HBV的作用机制。 方法:(1)制备灵猫方药物水提物，配制含125ug/ml、250ug/ml、500ug/ml、1000ug/ml和5000ug/ml灵猫方培养基。(2)用含药培养基培养HepG2.2.15细胞和HepAD38细胞，每隔3天收集上清液和细胞。(3)运用ELISA法检测细胞上清液和细胞内的HBsAg和HBeAg; Q-PCR法检测上清液HBV DNA、Taqman PCR检测细胞内PgRNA、sRNA和cccDNA、SYBR green-PCR法检测 La-mRNA，并比较HBsAg、HBeAg、 DNA、PgRNA、sRNA、cccDNA和La-mRNA各指标抑制率的差异。 结果： 1灵猫方对HBsAg和HBeAg抑制率的比较 1.1灵猫方培养3天时对HBsAg和HBeAg抑制率的比较 (1)灵猫方培养3天时对HepG2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg抑制率的比较灵猫方对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg的抑制率分别为-4％(125ug/ml)、40％(250ug/ml)、60％(500ug/ml)、83％（1000ug/ml）;对HBeAg的抑制率分别为-11％(125ug/ml)、46％(250ug/ml)、65％(500ug/ml)、89％(1000ug/ml)。 (2)灵猫方培养3天时对HepAD38细胞上清液HBsAg和HBeAg抑制率的比较灵猫方对HepAD38细胞上清液中HBsAg的抑制率分别为23％(125ug/ml)、33％(250ug/ml)、43％(500ug/ml)、53％(1000ug/ml);对HBeAg的抑制率分别为-9％(125ug/ml)、-3％(250ug/ml)、18％(500ug/ml)、60％(1000ug/ml)。经统计分析:与空白对照组相比，250ug/ml、500ug/ml、1000ug/ml灵猫方组均能明显降低HepG2.2.15细胞上清液HBsAg和HBeAg的含量(P＜0.05)。各浓度灵猫方组均能明显降低HepAD38细胞上清液HBsAg的含量(P＜0.05);500ug/ml、1000ug/ml灵猫方组均能明显降低上清液HBeAg的含量(P＜0.05)。 1.2灵猫方培养6天时对HBsAg和HBeAg抑制率的比较 1.2.1灵猫方培养6天时对HepG2.2.15细胞中HBsAg和HBeAg抑制率的比较 (1)灵猫方对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg抑制率 灵猫方对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg的抑制率分别为27％（125ug/ml）、63％(250ug/ml)、82％(500ug/ml)、90％(1000ug/ml);对HBeAg的抑制率分别为-9％(125ug/ml)、3％(250ug/ml)、57％(500ug/ml)、91％(1000ug/ml)。 (2)灵猫方对HepG2.2.15细胞内HBsAg和HBeAg抑制率 灵猫方对HepG2.2.15细胞内HBsAg的抑制率分别为-44％(125ug/ml)、-20％(250ug/ml)、39％(500ug/ml)、83％（1000ug/ml）;对HBeAg的抑制率分别为-28％(125ug/ml)、16％(250ug/ml)、59％(500ug/ml)、95％(1000ug/ml)。 经统计分析:与空白对照组相比，各浓度灵猫方组均能明显降低HepG2.2.15细胞上清液HBsAg的含量(P＜0.05);500ug/ml、1000ug/ml灵猫方组均能明显降低上清液HBeAg的含量(P＜0.05)。500ug/ml、1000ug/ml灵猫方组均能降低细胞内HBsAg的含量(P＜0.05);250ug/ml、500ug/ml、1000ug/ml灵猫方组均能降低细胞内HBeAg的含量(P＜0.05)。 1.2.2灵猫方培养6天时对HepAD38细胞中HBsAg和HBeAg抑制率的比较 (1)灵猫方对HepAD38细胞上清液中HBsAg和HBeAg抑制率 灵猫方对HepAD38细胞上清液中HBsAg的抑制率分别为27％(125ug/ml)、63％(250ug/ml)、82％（500ug/ml）、90％（1000ug/ml）;对HBeAg的抑制率分别为5％(125ug/ml)、-20％(250ug/ml)、38％(500ug/ml)、90％(1000ug/ml)。 (2)灵猫方对HepAD38细胞内中HBsAg和HBeAg抑制率 灵猫方对HepAD38细胞内HBsAg的抑制率分别为27％（125ug/ml）、6％(250ug/ml)、19％（500ug/ml）、94％（1000ug/ml）;对HBeAg的抑制率分别为40％(125ug/ml)、57％(250ug/ml)、21％(500ug/ml)、82％(1000ug/ml)。 经统计分析:与空白对照组相比，各浓度灵猫方组均能降低细胞上清液HBsAg的含量(P＜0.05);500ug/ml、1000ug/ml灵猫方组均能降低上清液HBeAg的含量(P＜0.05)。1000ug/ml灵猫方组均能降低细胞内HBsAg的含量(P＜0.05);各浓度灵猫方组均能降低细胞内HBeAg的含量(P＜0.05)。 2灵猫方对HepG2.2.15细胞上清液DNA的抑制率 500ug/ml灵猫方、1000ug/ml灵猫方、50uM拉米夫定、5uM拉米夫定作用HepG2.2.15细胞4天，第2天对HepG2.2.15细胞上清液DNA的抑制率分别为-32％(500ug/ml)、-40％(1000ug/ml)、98％(50uM)、93％(5uM);第4天抑制率分别为-151％(500ug/ml)、58％(1000ug/ml)、75％(50uM)、64％(5uM)。经统计分析:第2天时，与空白对照组相比，500ug/m、1000ug/ml灵猫方能提高HepG2.2.15细胞上清液DNA的含量(P＜0.05);50uM、5uM拉米夫定能显著降低HepG2.2.15细胞上清液DNA的含量(P＜0.05)。第4天时500ug/ml灵猫方能提高HepG2.2.15细胞上清液DNA的含量(P＜0.05)，1000ug/ml灵猫方、50uM、5uM拉米夫定能显著降低HepG2.2.15细胞上清液DNA的含量(P＜0.05)。 3灵猫方对PgRNA、sRNA、cccDNA和La-mRNA抑制率的比较 3.1灵猫方培养6天时对HepG2.2.15细胞中PgRNA、sRNA和La-mRNA抑制率的比较灵猫方培养6天时对HepG2.2.15细胞中PgRNA的抑制率分别为69％(500ug/ml)和86％(1000ug/ml)，对sRNA的抑制率为63％(500ug/ml)和73％(1000ug/ml)，对La-mRNA的抑制率为65％(500ug/ml)和56％(1000ug/ml)。 3.2灵猫方培养6天时对HepAD38细胞中PgRNA、sRNA和La-mRNA抑制率的比较灵猫方培养6天时对HepAD38细胞中PgRNA的抑制率分别为84％(1000ug/ml)和81％(5000ug/ml)，对sRNA的抑制率为92％(1000ug/ml)和91％(5000ug/ml)，对La-mRNA的抑制率为49％(1000ug/ml)和87％(5000ug/ml)。 3.3灵猫方培养9天时对HepG2.2.15细胞中cccDNA的抑制率为66％(1000ug/ml)经统计分析:各浓度灵猫方组均能降低HepG2.2.15细胞和HepAD38细胞中PgRNA、sRNA、cccDNA和La-mRNA的含量(P＜0.05)。 结论: (1)灵猫方能抑制HepG2.2.15细胞和HepAD38细胞中HBsAg和HBeAg的合成； (2)灵猫方能明显降低HepG2.2.15细胞和HepAD38细胞中PgRNA、sRNA、cccDNA和La-mRNA的水平。