海洋溶藻弧菌的培养优化及溶藻粉剂胶囊球工艺研究

来源 :深圳大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:hyc1211
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目前赤潮藻的防治主要以物理法、化学法为主,其防控效果总体达不到预期,并容易产生二次污染,因此利用生物手段,尤其是溶藻细菌防治有害赤潮藻的研究逐渐得到重视。国内外对溶藻细菌的研究主要集中在溶藻机制、活性物质提取、相关功能基因等研究,溶藻细菌固定化、溶藻活性物质粉剂化、胶囊化等应用工艺的研究相对较少,本论文将溶藻弧菌进行发酵优化,将发酵液上清经喷雾干燥获得溶藻粉剂,对粉剂进行包埋制备适应于实际赤潮防治的悬浮型胶囊球。本研究对溶藻弧菌H115(简称H115)进行溶藻特性的探究,确定藻菌比例为1:7000,作用10min作为单因素优化溶藻作用的条件;在溶藻方式探究实验中确定H115属于间接溶藻,且对数期后的H115溶藻物质才能大量累计,发挥较强的溶藻效果。本研究通过单因素法筛选出:碳源、氮源、温度和发酵时间这四个因子对H115溶藻活性物质的分泌影响较大;本研究采用U6(64)均匀设计表将上述四个因子进行均匀设计法优化,优化结果为:(1)H115溶藻效率最优组为:以2216 E为基础培养基,添加山梨醇:1.0%,peptone:2.0%,初始pH为7.5,发酵温度40℃,摇床转速200 rpm,发酵时间54 h;(2)H115的生长密度最优组合为:山梨醇添加比例为1.5%,peptone:3.0%,发酵温度24℃,发酵时间48h。本研究对优化条件进行5L、100L发酵罐的扩大试验,以藻菌个数比1:600添加,作用藻细胞4h时,5L发酵罐培养、100L发酵罐培养的溶藻效果分别达到:94.23%、97.08%,表明经优化后,H115可适用于大规模发酵,且溶藻能力得到提升。本研究采用喷雾干燥法,以H115发酵上清液为基础,按浓度梯度与佐料混合,制备五种不同比例的H115发酵上清粉剂:五种比例粉剂(50%、60%、70%、80%、90%)按一定比例作用藻液24h后的LD100分别为:0.33%、0.15%、0.13%、0.10%、0.10%;采用锐孔凝固浴法,研究制备了泡腾型的抑藻悬浮海藻酸钠胶囊球。经过单因素法优化胶囊球后,当胶囊球与血红哈卡藻比例为1:100时,其作用16h的溶藻效果为73.32%,在24h达到100%,经研究实验,所制胶囊球通过缓慢释放H115上清粉剂到藻液中,起到抑藻作用的同时能悬浮于液体表面,为赤潮的防治提供可能。
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