【摘 要】
：
样品制各是决定2-DE分辨率和重复性的关键因素之一.在植物蛋白质组研究中,植物组织由于本身特有的特点,使其蛋白提取比动物、微生物的更复杂,目前大多使用TCA/丙酮法提取植物
论文部分内容阅读
样品制各是决定2-DE分辨率和重复性的关键因素之一.在植物蛋白质组研究中,植物组织由于本身特有的特点,使其蛋白提取比动物、微生物的更复杂,目前大多使用TCA/丙酮法提取植物组织总蛋白,但该法缺点是沉淀的蛋白复溶难及蛋白损失较多,建立适用于小麦叶片蛋白质组分析的样品制备方法势在必行.
以小麦Taichung29苗期叶片为材料,首先通过单向SDS-PAGE筛选比较3种较简单的蛋白样品制各方法:TCA/丙酮法、改进的酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及尿素/硫脲提取法提取法,然后选用蛋白丢失少的制备方法进行双向电泳分离和胶体考染,并选取代表性的蛋白点进行质谱分析及数据库比对,分析评价其提取分离蛋白能力的差别,为抗条锈比较蛋白质组学研究奠定基础.
实验结果表明,三种方法提取的小麦叶片蛋白经SDS-PAGE分离后条带数目、位置以及染色深浅均有较大差异.采用改进的酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及尿素/硫脲提取法提取的总蛋白,经pH3-10/pH4-7IPG胶条等电聚焦,SDS-PAGE分离,可检测到较多的蛋白点数,分别为1016±203、1014±281和1563±37、1555±280.在pH3-10范围内,与尿素/硫脲提取法相比,酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法能较好地检测到碱性区域的蛋白点;尿素/硫脲提取法利于分子量大于70kDa的蛋白分离.在pH4-7范围内,尿素/硫脲提取法在酸性端能分离出数个特异蛋白点,与酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法相比,能相对较多的溶解分离出某些蛋白点;酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法在高分子量区分离的蛋白点数又好于尿素/硫脲提取法.进行肽质量指纹谱分析时,这两种样品制备方法获取的蛋白谱峰图基线平稳,噪音极低,说明本实验提供的技术体系与质谱兼容性好.
本文提供的两种小麦叶片样品制备方法,可分离检测到较多的小麦叶片蛋白点,并与质谱兼容性好,有助于小麦叶片蛋白质组研究的开展.
其他文献
动物精子形成过程中,精子细胞形成精子,形态结构发生了显著变化。精子由圆形变为长形,染色质高度浓缩,这个过程中核碱性蛋白对浓缩精子核和保护DNA遗传信息起了重要作用。细
时域微分方法(TDDE)在电磁场数值计算中已经得到广泛的运用，其中最为著名的便是时域有限差分法(FDTD)。时域微分法，顾名思义地讲，就是计算电磁学中微分方程法在时域的形式。众所周知，电磁场数值计算方法可分为时域方法和频域方法，又可分为积分方程法和微分方程法。时域微分方法结合时域和微分方程的优点，既可以计算目标的宽频特性，又能够分析复杂边界的目标，并随计算机CPU速度和内存容量的飞速发展，对电大尺
摘要：物理学作为一门与我们生活息息相关的自然学科，物理教学生活化也日益成为教育改革的侧重点。随着物质条件的进步和教育水平的提高，教材的编辑也更趋于生活化、丰富化，而教育工作者们的教学方法也应随之结合，逐步的探究与进步。本着探究高效教学方式的原则，实现教学环境优化，调动学生的积极参与性，本文将以“利用生活中的物品进行物理实验教学”为主题，作出简单的研究探讨，希望能为今后的教育研究尽绵薄之力。 关键
本文以IAA2为研究对象，通过构建目的基因的启动子连接报告基因载体转化拟南芥，分析该基因在植物组织中的表达部位；通过运用GATEWAY体系，构建与EGFP的融合蛋白载体研究IAA2蛋白的
自然界中,真菌所处的环境的pH值一直处于不断变化之中,这种改变对真菌的生长、发育、次生代谢等生理活动具有非常重要的影响；为了生存和繁衍,真菌必须适应不断改变的酸碱环境
静电纺纳米纤维具有尺寸可控、比表面积大、孔隙率高和独特的三维网状结构等特点，可以很好地模拟天然细胞外基质，因此在组织工程支架和药物载体领域具有广泛的应用前景。聚乳酸
黄花刺茄是一种入侵性极强的一年生杂草。该植物不仅严重影响草场及农田中棉花等作物的生长,而且还影响到牲畜皮毛的品质,牲畜误食后可引起中毒死亡,同时还传播病虫害。该种
白藜芦醇(Resveratrol，3，4’5-trihydroxy-trans-stilbene，简称Res)是一种天然存在的多酚化合物。已经发现花生、葡萄、虎杖等植物中含有白藜芦醇。据报道，白藜芦醇有着广泛的生物学和约理学特性，如抗癌、抗炎症、心血管保护等作用。白藜芦醇在植物保护中也发挥着重要作用。白藜芦醇合酶(resveratrol synthase，RS；EC 23.1.95)是芪类(sti
通过对塔里木河中下游的铁干里克、库木吐格、英苏和阿拉干四个样地中的9种植物:乔木杨柳科杨属的胡杨(Populus euphratica),灌木柽柳科柽柳属的柽柳(Tamarix sp.)、茄科枸杞
本课题组根据毕赤酵母的信号肽序列，按照酵母偏爱密码，人工合成毕赤酵母的新型信号肽MS，并构建了新型酵母表达载体pPIC9k-MS，构建重组质粒pPIC9k-MS-phyA，然后电击转化毕赤酵母，筛