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目的：研究FHIT基因在三种人胃癌细胞系中的表达状况,重组质粒转染FHIT mRNA阴性表达的人胃癌细胞系MKN-45后,FHIT基因过表达。观察转染前后人胃癌细胞系MKN-45增殖、克隆形成能力、黏附能力、迁移能力、侵袭能力等生物学行为的变化,以期探讨FHIT基因在胃癌发生发展中的作用及可能的机制。
方法：
1.应用RT-PCR法检测人胃癌细胞系BGC-823、MGC-803、MKN-45中FHIT基因mRNA的表达状况。
2.构建pcDNA3.1-FHIT真核表达载体,并转染到FHIT mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,RT-PCR检测转染前后MKN-45细胞FHIT基因mRNA表达水平改变情况。
3.四唑盐比色法(MTT)、平板克隆形成实验观察pcDNA3.1-FHIT转染前后MKN-45细胞增殖能力的改变。
4.内皮细胞黏附实验检测pcDNA3.1-FHIT转染前后MKN-45细胞与内皮细胞黏附能力的改变。
5.Millicell小室细胞迁移实验检测pcDNA3.1-FHIT转染前后MKN-45细胞迁移能力的改变。
6.Transwell小室侵袭实验检测pcDNA3.1-FHIT转染前后MKN-45细胞侵袭力的改变。
结果：
1.RT-PCR结果提示FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达,在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达。
2.成功构建pcDNA3.1-FHIT真核表达质粒。
3.转染pcDNA3.1-FHIT至FHIT基因mRNA阴性表达的人胃癌细胞系MKN-45,使其FHIT基因过表达。
4.FHIT基因的过表可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成。
5.FHIT基因的过表达可导RMKN-45细胞株的迁移能力明显降低。
6.FHIT基因的过表对于MKN-45细胞株与内皮细胞的粘附能力以及MKN-45细胞株的侵袭能力影响无统计学意义。
结论：
FHIT基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异。FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达,在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达。成功构建的真核表达载体pcDNA3.1-FHIT并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,使该细胞FHIT基因过表达。FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成,FHIT基因的过表达致MKN-45细胞株的迁移能力也明显降低,提示FHIT基因可能与胃癌的发生与演进相关。FHIT基因过表达对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力以及MKN-45细胞的侵袭能力无明显影响。综上所述,FHIT基因可影响胃癌细胞株的生物学行为。本实验为进一步揭示FHIT基因与胃癌发病机制的相关性提供了实验及理论依据。