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本文以中华鳑鮍(Rhodeus sinensis)为研究对象,利用ISSR分子标记技术,对中华鳑鮍3个自然群体(河北省磁县东伍仕水库群体、河南省安阳市彰武水库群体和河南省信阳商城县鲇鱼山水库群体)的遗传多样性进行分析,了解中华鳑鮍的遗传多样性水平和遗传结构,为其分类地位的甄别和其资源保护提供新的资料和科学依据。主要研究结果如下:
(1)经条件优化,建立了中华鳑鮍ISSR-PCR最佳反应体系,10×Taq Buffer(Mg2+)2.5μl、25mmol/L MgCl22μl、10mmol/L4×dNTP-mixture0.75μl、10mmol/L Primer1μl、5U/μl TaqDNA聚合酶0.15μl、50ng/μl模板1.5μl,最终加无菌的ddH2O至25μl。扩增程序为94℃预变性5min,然后进入38个循环,即94℃变性40 sec,48℃-56℃(随不同引物而定)退火40 sec,72℃延伸90 sec;最后72℃终延伸10min,4℃保存。
(2)筛选出12个引物,对中华鳑鮍3个群体共90尾中华鳑鮍基因组DNA进行ISSR-PCR扩增,共检测到98个位点,多态位点73个,多态性比例为74.49％。利用POPGENE软件分析3个中华鳑鮍群体的多态位点比例(PPB)、观测等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Neis基因多样度(h)、Shannons信息指数(I)和遗传距离(D)分别在51.58％～054.26％、1.3367～1.4796、1.2368～1.3893、0.17660～0.3318、0.1956～0.3016、0.1547～0.2217之间,各群体所有遗传多样性指标综合显示,中华鳑鮍3个群体的遗传多样性保持在一定水平,各居群间的遗传多样性水平依次为:安阳＞河北＞信阳。
(3)利用POPGENE基于Neis基因多样性计算中华鳑鮍各居群间遗传分化系数(Gst)为0.4051,说明中华鲭皴各居群间存在强烈的遗传分化。由Gst计算的种群间基因流(Nm)为0.7344,基因流水平低。
(4)根据Nei的公式计算群体间的无偏遗传距离(D)和遗传相似系数(S),结果显示,河北群体与安阳群体遗传距离最小为0.2033,河北群体与信阳群体遗传距离最大为0.2995;信阳群体与河北群体遗传相似系数最小为0.7412,安阳群体与河北群体遗传相似系数最大为0.8160,表明河北群体与安阳群体亲缘关系较近,河北群体与信阳群体亲缘关系较远。UPGMA聚类显示,河北群体和安阳群体间的亲缘关系最近,最先聚在一起,然后与信阳群体聚在一起。