ITSN2-L与RABEP1的相互作用及功能研究

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人ITSN(intersectin)蛋白是一类在胞浆中分布的连接蛋白(adaptor protein),在细胞的胞吞胞吐、信号转导、受体降解和细胞生存中起着重要作用。现在已发现两个ITSN同源蛋白——ITSN1和ITSN2,ITSN1和ITSN2又分别有一个短的和长的异构体ITSNl-S、ITSN2-S、ITSNl-L和ITSN2-L。ITSN-S广泛表达于人的各种组织和细胞,ITSN-L则主要在神经组织中表达。研究表明,ITSN能够参与胞吞胞吐作用,在神经元细胞中对维持神经递质的释放起重要作用,此外ITSN还参与细胞内信号传导通路的调节。   本文用酵母双杂交的方法筛选得到10个与ITSN2-L的CC结构域相互作用的蛋白,我们选择了重复数最多的,克隆并表达了RABEP1基因,并证实了RABEP1蛋白与ITSN2-L能够在体外相互作用,而且免疫共沉淀的结果表明在HeLa细胞系中过表达的ITSN2-L与RABEP1蛋白能够处于同一复合体中,同时发现HeLa细胞系中,内源、外源表达的ITSN2-L蛋白与RABEP1有明显的共定位。结果表明这两种蛋白能相互作用,通过这样的结合完成复杂的调节功能。   本文还对ITSN2-L与RABEP1蛋白的功能进行了初步探索,发现ITSN2-L过表达可以导致RABEP1蛋白通过蛋白酶体途径降解,而抑制ITSN2-L的表达时,RABEP1蛋白则有所升高;而且,ITSN2-L的过表达对RABEP1过表达所产生的巨大囊泡有抑制作用。这些结果说明,ITSN2-L是RABEP1的负调控蛋白,可以通过调控RABEP1蛋白量的变化,进而参与囊泡的转运过程。
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